人分泌型免疫球蛋白A(SIgA)ELISA試劑盒操作流程
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍： 96T
0.3µg/ ml -16µg/ ml
使用目的： 本試劑盒用于測定人唾液樣本中分泌型免疫球蛋白 A(SIgA)含。 實驗原理 本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標本中人分泌型免疫球蛋白 A(SIgA)水平。用純化的抗 原包被微孔板，制成固相抗原，往包被單抗的微孔中依次加入分泌型免疫球蛋白 A(SIgA)， 再與 HRP 標記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標抗原復(fù)合物，過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深 淺和樣品中的分泌型免疫球蛋白 A(SIgA)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度 （OD 值），通過標準曲線計算樣品中人分泌型免疫球蛋白 A(SIgA)濃度。 試劑盒組成 1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶 2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品（32µg/ ml） 0.5ml×1 瓶 3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶 4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份 5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張 6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個 標本要求 1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融 2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 操作步驟 1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。 16µg/ ml 5 號標準品 150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液 8µg/ ml 4 號標準品 150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 4µg/ ml 3 號標準品 150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 2µg/ ml 2 號標準品 150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 1µg/ ml 1 號標準品 150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、 待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，
然后再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。 4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用 5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。 6. 加酶：孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。 7. 溫育：操作同 3。 8. 洗滌：操作同 5。 9. 顯色：孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 15 分鐘. 10. 終止：孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。 11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。 操作程序總結(jié)：
人分泌型免疫球蛋白A(SIgA)ELISA試劑盒操作流程計算 以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的 OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標 準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度。 注意事項 1．試劑盒從冷環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未 用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。 3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在 5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)多，推薦使用排槍加樣。 4． 請次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含過高（樣本 OD 值 大于標準品孔*孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計 算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物請避光保存。 7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準. 8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 9．本試劑不同批號組分不得混用。

人分泌型免疫球蛋白A(SIgA)ELISA試劑盒操作流程保存條件及有效期 1．試劑盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6 個月