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酶聯(lián)免疫DIY夾心法實驗技術(shù)指南

來源:上海滬鼎生物科技有限公司   2017年03月21日 10:25  

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    酶聯(lián)免疫吸附劑測定實驗基本原理:
    1.使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性。
    2.使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。
    3.在測定時,把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開,zui后結(jié)合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。
    4.加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析。
    由于酶的催化頻率很高,故可極大地地放大反應(yīng)效果,從而使測定方法達到很高的敏感度。 
      
    酶聯(lián)免疫DIY夾心法實驗技術(shù)指南:
1.選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進行配對;若選擇兩個單抗,必須識別不同表位的抗體;從同一家公司選擇抗體對。
2.為了確定信號和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實驗中進行彼此相抗的滴定。同時,應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標準品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進行操作。
3.標準品的配制:對于每種細胞因子應(yīng)仔細閱讀說明書,注意每批的細節(jié)。在使用細胞因子前,瞬時離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細胞因子。根據(jù)每批說明書中的細節(jié),將凍干的細胞因子復(fù)溶。
4.一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml??衫脴藴实腅LISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
5.為了優(yōu)化靈敏度,建議過夜孵育標準品和標本。
6.若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng),應(yīng)嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。
7.當(dāng)測定混合液體中的抗原時,如血清,建議在標本稀釋液中加不相干的Ig.
    非常感謝您多年的支持相伴!上海滬鼎酶聯(lián)免疫試劑盒(ELISA試劑盒)產(chǎn)品及更新非常快,基本上每周均有新產(chǎn)品出現(xiàn)。上有齊全的技術(shù)資料以及客戶評論,并提供實時在線技術(shù)咨詢,使您使用產(chǎn)品時沒有任何后顧之憂。

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