間接法測抗體的幾大要點

來源：上海晶抗生物工程有限公司 2017年04月05日 09:25

1．酶標(biāo)抗抗體工作濃度的選擇

（1）用100ng/ml人IgG進行包被，洗滌。

（2）將酶標(biāo)抗人IgG用稀釋液作一系列稀釋后分別加入已包被的孔中，保溫、洗滌。

（3）加底物顯色。加酸終止反應(yīng)后，讀取吸亮度（A），繪制曲線如圖15-10。讀取A值在1.0時的酶標(biāo)抗體稀釋度，作為酶標(biāo)抗體的工作濃度。該酶標(biāo)抗人IgG的工作濃度應(yīng)為1/1600。

2．棋盤滴定法選擇包被抗原工作濃度

（1）用包被液將抗原作一系列稀釋后進行包被，洗滌。

（2）將強陽性參考血清、弱陽性參考血清和陰性參考血清用稀釋液作1:100稀釋，加樣，保溫，洗滌。

（3）加按工作濃度稀釋的酶標(biāo)抗人IgG抗體，保溫，洗滌。

（4）加底物顯色。加酸終止反應(yīng)后讀取A值。

（5）選擇強陽性參考血清的A值為0.8左右、陰性參考血清的A值小于0.1的包被抗的的稀釋度作為工作濃度。表15-1為本例的測定結(jié)果，表中數(shù)字為A值。從表中可見1:200為zui舒適的工作濃度。

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