人源細(xì)胞培養(yǎng)常用試劑
一、 PBS 磷酸緩沖鹽溶液（一般作為溶劑，起溶解保護(hù)試劑的作用）

PBS 1L配方pH7.4：磷酸二氫鉀(KH2PO4)：0.27g，

*(Na2HPO4)：1.42g，

加去離子水約800mL充分?jǐn)嚢枞芙?，然后加入濃鹽酸調(diào)pH至7.4，

zui后定容到1L

高溫高壓滅菌后置于4攝氏度冰箱保存待用。

（一般情況下，現(xiàn)配現(xiàn)用，易變質(zhì)暴露在空氣中）

二、 細(xì)胞消化液

0.25%*-0.02%EDTA的配制

配方：100ml PBS,0.25g*

步驟：

1、先配100mlPBS

2、稱*0.25g

3、加入PBS中，低速攪拌 〈4h冰浴中,或者4℃過(guò)夜低速攪拌0.5h冰浴中(儲(chǔ)存-20攝氏度冰箱中，使用保存4攝氏度)

4、調(diào)PH7.4

5、仍在冰浴中

6過(guò)濾，分裝，-20℃保存，4℃短期內(nèi)用完

Tip:低速很重要，機(jī)械攪拌對(duì)酶是一種沖擊，如果起沫，酶就變性了。低溫，防止酶失活

對(duì)難消化的人源細(xì)胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)

Tip:因?yàn)镋DTA可以絡(luò)合Ca2 ，增加消化效力

注意事項(xiàng)：

1、*是0.25%,這是質(zhì)量體積比，就是說(shuō)0.25g*溶于100ml PBS,注意，盡量不要用水來(lái)溶，因?yàn)橐３譂B透壓。

2、EDTA的工作液溶度是0.02%－0.1%，根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度自己調(diào)整。EDTA并不是必須的，容易消化的細(xì)胞可不加。EDTA對(duì)細(xì)胞貼壁性有影響，因此使用時(shí)要甚重。如果影響貼壁，但消化時(shí)必須要用，那么在用*培養(yǎng)基終止消化后，可離心棄上清，再加*培養(yǎng)基培養(yǎng)，可去除EDTA。如果對(duì)貼壁沒影響，那么可不離心。

3、EDTA的濃度也是質(zhì)量體積比。和*一起溶于PBS。

4、注意，血清可終止*的作用，但不能終止EDTA的作用，對(duì)有些細(xì)胞來(lái)說(shuō)，終止消化后的離心是必要的。

5、*和EDTA在pH 為8左右的時(shí)候zui易溶解，在配制時(shí)可先滴幾滴NaOH將pH調(diào)至8，注意，*可使溶液變酸，所以要邊溶邊測(cè)pH，隨時(shí)調(diào)整。注意，不可加過(guò)量NaOH，否則過(guò)堿，細(xì)胞會(huì)*。

6、*EDTA相對(duì)比較難溶，可用磁力攪拌器，或放入4度冰箱過(guò)夜，待溶解后過(guò)濾除菌。

7、可配2－3乘的*，這樣比較節(jié)約時(shí)間和濾器，用的時(shí)候?qū)ι蠝缇鶳BS即可。

8、儲(chǔ)存液放在－20度冰箱凍存，使用液放在4度，用的時(shí)候不要放在27度水浴鍋溫浴，因?yàn)檫@樣會(huì)讓*很快失效，使用前放在室溫下一會(huì)，因?yàn)榧拥牧亢苌伲砸话悴粫?huì)凍壞細(xì)胞。

9、消化時(shí)，向培養(yǎng)瓶中加入適量*，個(gè)人經(jīng)驗(yàn)，一般10cm培養(yǎng)皿加入0.5ml足已，加入后，立刻搖晃培養(yǎng)皿，使*鋪滿，一旦鋪滿，立刻用*吸去多余的*，再放入37度培養(yǎng)箱消化。

10、注意，過(guò)量的*對(duì)細(xì)胞是有害的，而EDTA過(guò)多也會(huì)影響貼壁，所以沒必要把細(xì)胞泡在*里面消化。

11、*37攝氏度消化效果，低于37度也有消化能力，有些容易消化的細(xì)胞在消化時(shí)甚至不需要放入培養(yǎng)箱。注意，不可消化過(guò)久。

三、細(xì)胞培養(yǎng)基

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC細(xì)胞

培養(yǎng)基RPMI 1640 培養(yǎng)基/DMEM培養(yǎng)基

肝癌細(xì)胞HepG-2細(xì)胞培養(yǎng)基

人源細(xì)胞DMEM培養(yǎng)液(含100 U/ml-*、100 U/ml*、10%新生牛血清