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ATCC細(xì)胞傳代后多久能轉(zhuǎn)染?

來(lái)源:上海莼試生物技術(shù)有限公司   2017年08月22日 11:31  

常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)室ATCC細(xì)胞傳代方法有貼壁細(xì)胞用消化法傳代和懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞采用離心分離后傳代。貼壁細(xì)胞消化時(shí),因細(xì)胞對(duì)*的敏感程度不同,所以消化時(shí)間差別較大。對(duì)于初學(xué)者,消化的程度也很難掌握好,加入適量*,輕輕搖晃3-4次(使細(xì)胞充分與*接觸),隨即吸取*,放于培養(yǎng)箱消化,數(shù)分鐘后取出,輕拍培養(yǎng)瓶,見(jiàn)細(xì)胞自瓶壁滑下即可,若沒(méi),繼續(xù)消化。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的細(xì)胞,接種于培養(yǎng)板,加培養(yǎng)液,培養(yǎng)過(guò)夜(細(xì)胞長(zhǎng)至85-90%滿);按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。轉(zhuǎn)染時(shí)應(yīng)注意預(yù)備脂質(zhì)體/DNA混合物必須在無(wú)血清下進(jìn)行。在轉(zhuǎn)染之前更換培養(yǎng)基,可提高轉(zhuǎn)染效率,但所用培養(yǎng)基必須37℃預(yù)溫。 脂質(zhì)體/ DNA混合物應(yīng)當(dāng)逐滴加入,盡可能保持一致,從培養(yǎng)皿一邊到另一邊,邊加入邊輕搖培養(yǎng)皿,以確保均勻分布和避免局部高濃度。

對(duì)于細(xì)胞轉(zhuǎn)染,一般在細(xì)胞中期轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染效率會(huì)相對(duì)高一些。這個(gè)時(shí)候的細(xì)胞狀態(tài)是的。對(duì)于HEK293T來(lái)說(shuō),一般轉(zhuǎn)染的時(shí)間是在傳代后24hr以內(nèi)。轉(zhuǎn)染后48hr,外源基因肯定是有表達(dá)的。至于72hr,應(yīng)該也還是有表達(dá)的,ATCC細(xì)胞可能表達(dá)量會(huì)很低,主要是這個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞大部分都衰老了。建議293T收集細(xì)胞,在轉(zhuǎn)染后36-48hr收集。
YSRIBIO012    Zidovudine     *標(biāo)準(zhǔn)品    30516-87-1     400mg    
YSRIBIO013    Zalcitabine Related Compound A    扎西他濱相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品    7481-88-1     50mg    
YSRIBIO014    Zalcitabine    扎西他濱標(biāo)準(zhǔn)品    7481-89-2     200mg    
YSRIBIO015    Yohimbine Hydrochloride    鹽酸育亨賓標(biāo)準(zhǔn)品    65-19-0     200mg    
ATCC細(xì)胞

 

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