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如何分離和培養(yǎng)ATCC細(xì)胞?

來源:上海莼試生物技術(shù)有限公司   2017年10月12日 11:46  

ATCC細(xì)胞的原代培養(yǎng)與正常細(xì)胞的原代培養(yǎng)的條件基本相似。一般常用腫瘤原代細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基、5~10%血清濃度、細(xì)胞培養(yǎng)添加劑、抗生素等等即可?;蛟谠囵B(yǎng)時需加入原代細(xì)胞培養(yǎng)的特制添加物,或原患者血清(1~2%)以利細(xì)胞生長。用細(xì)胞生長因子如胰島素、雌激素等等。也可以考慮動物媒介培養(yǎng)。

根據(jù)細(xì)胞種類不同選用不同的促細(xì)胞生長因子。腫瘤組織分離為腫瘤細(xì)胞原代培養(yǎng)的方法主要有組織塊法、酶消化法、鉭網(wǎng)法、脫落細(xì)胞法等。

1、組織塊法

將取得的瘤組織去除脂肪、結(jié)締組織及壞死部分,在平皿中用Hanks液洗3次,剪碎組織,切成1~2mm3小塊,接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,370C、5%CO2或加蓋并塞在普通恒溫箱中培養(yǎng)。

2、酶消化法

在剪碎組織,切成1~2mm3小塊中,加入0.25%*或2000U/ml膠原酶,在370C水浴中消化30min或更長一些,去除消化液,用洗液洗3次,培養(yǎng)基洗1次后,用*培養(yǎng)基懸浮,并用吸管吹打分散制成細(xì)胞懸液,計數(shù)。以(5~10)x108個/L細(xì)胞濃度,在專業(yè)性原代腫瘤細(xì)胞*培養(yǎng)體系中,370C、5% CO2下分瓶(或皿)中培養(yǎng)。

3、鉭網(wǎng)法

在一張面積約為1cm2的鉭網(wǎng)上放入上述剪碎的一塊或幾塊腫瘤組織塊(1~2mm3大?。?,用鑷子輕壓,使其粘于網(wǎng)上,再把鉭網(wǎng)放入培養(yǎng)皿中,使網(wǎng)下的組織塊與皿壁緊緊接觸, 在專業(yè)性原代腫瘤細(xì)胞*培養(yǎng)體系中,于370C、5% CO2下培養(yǎng),每隔2~3天換液一次,5天后可見細(xì)胞從網(wǎng)上移出,并能在相當(dāng)于腫瘤*位形成純凈的單層腫瘤細(xì)胞。

4、脫落細(xì)胞法

將新鮮的腫瘤組織去除脂肪和結(jié)締組織后,洗液洗2次,用刀片將腫瘤組織切成細(xì)薄片,在切割的同時有許多腫瘤細(xì)胞脫落下來,脫落細(xì)胞經(jīng)洗滌后,加入*培養(yǎng)基,便可獲得較純的上層細(xì)胞在專業(yè)性原代腫瘤細(xì)胞*培養(yǎng)體系中,于培養(yǎng)瓶(或皿)中,370C、5% CO2下培養(yǎng),每隔2-3天換液一次,7-10天腫瘤細(xì)胞逐漸長成單層。

zui后,小編提示您一定要記?。?/p>

1、ATCC細(xì)胞全程操作和周圍環(huán)節(jié)一定要嚴(yán)格無菌,污染可能伴隨原代細(xì)胞分離、培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇、運輸?shù)鹊哪骋画h(huán)節(jié)或整個環(huán)節(jié)中,污染一定是原代細(xì)胞培養(yǎng)失敗的*問題。

2、一定要用專業(yè)性、配套的原代細(xì)胞*培養(yǎng)體系。在原代細(xì)胞分離和*代原代細(xì)胞培養(yǎng)用的原代細(xì)胞培養(yǎng)體系是該品種原代細(xì)胞培養(yǎng)的原代細(xì)胞培養(yǎng)體系。
包裝:    Many types of cells        視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞    5 × 105次方(1ml)
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ATCC細(xì)胞

 

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