（本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷）

使用說(shuō)明書(shū)

檢測(cè)原理

  試劑盒采用雙抗原一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被牛布氏桿菌捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗原，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中牛布氏桿菌（Brucella）的存在與否。

  樣品收集、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

  自備物品

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

  操作注意事項(xiàng)

1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。

2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3. 預(yù)處理后的樣本請(qǐng)按照操作步驟用*適當(dāng)稀釋以達(dá)到

  試劑盒的的檢測(cè)效果。

4. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5. 所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成名稱 96孔配置 48孔配置 備注

微孔酶標(biāo)板 12孔×8條 12孔×4條 無(wú)

陰性對(duì)照 0.5mL 0.5mL 無(wú)

陽(yáng)性對(duì)照 0.5mL 0.5mL 無(wú)

檢測(cè)抗原-HRP 10mL 5mL 無(wú)

20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋

* 6mL 3mL 無(wú)

底物A 6mL 3mL 無(wú)

底物B 6mL 3mL 無(wú)

終止液 6mL 3mL 無(wú)

封板膜 2張 2張 無(wú)

說(shuō)明書(shū) 1份 1份 無(wú)

自封袋 1個(gè) 1個(gè) 無(wú)

7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

  結(jié)果判斷

1.  試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00；

陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15。

2.  臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

4.  陽(yáng)性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off），樣品為陽(yáng)性

  試劑盒性能

1. 準(zhǔn)確性：陽(yáng)性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00；陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15，說(shuō)明試驗(yàn)結(jié)果有效。

2. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

4. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

5. 有效期：6個(gè)月

免責(zé)聲明

1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。

2. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。