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細胞轉(zhuǎn)染效率低的原因有哪些?

來源:上海邦景實業(yè)有限公司   2020年07月02日 11:28  

1.質(zhì)粒DNA或混和液中含有血清。 對策:用無血清培養(yǎng)基或Opti-MEM培養(yǎng)基。
2.質(zhì)粒DNA和轉(zhuǎn)染試劑的比率不是zui優(yōu) 對策:對大多數(shù)細胞而言,質(zhì)粒DNA和轉(zhuǎn)染試劑的比例為1:2-1:3,一般要做優(yōu)化實驗,比例從1:0.5-1:5 逐一檢測。
3.質(zhì)粒DNA 已部分降解或質(zhì)量不夠好 對策:用好的質(zhì)粒純化試劑確保質(zhì)粒DNA質(zhì)量,正確保存,確保質(zhì)粒DNA不被降解。
4.轉(zhuǎn)染試劑選擇不當(dāng)。建議選用效率高,毒性低的轉(zhuǎn)染試劑,比如Entranster試劑。
5.細胞密度不是*,優(yōu)化細胞密度。
6.混和加入細胞中不含血清。在轉(zhuǎn)染過程中使用含有血清的培養(yǎng)基,細胞狀態(tài)良好有利于轉(zhuǎn)染效率的提高。
7 .轉(zhuǎn)染體系中含有抑制物 轉(zhuǎn)染體系中不應(yīng)包含EDTA、檸檬酸、磷酸鹽、RPMI、硫酸軟骨素、透明質(zhì)酸酶、硫酸葡萄糖聚酶及硫酸化蛋白聚糖
8.檢驗轉(zhuǎn)染效率及表達的方法有問題 使用報告基因來檢測轉(zhuǎn)染效率,報告基因使你確定目標(biāo)基因的表達
9.啟動子及增強子不被包裝細胞識別。確認你構(gòu)建質(zhì)粒上的啟動子增強子與靶細胞相容。
10.轉(zhuǎn)染試劑保存不正確,轉(zhuǎn)染試劑保存在4℃。

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