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一、影響細菌生長的環(huán)境因素
營養(yǎng)物質(zhì)、能量和適宜的環(huán)境是細菌生長繁殖的*條件。
營養(yǎng)物質(zhì) 充足的營養(yǎng)物質(zhì)可以為細菌的新陳代謝及生長繁殖提供必要的原料和充足的能量。
氫離子濃度(pH) 每種細菌都有一個可生長的pH范圍, 以及zui適生長pH。多數(shù)病原菌zui適pH為7.2~7.6,在宿主體內(nèi)極易生存;個別細菌如霍亂弧菌在pH8.4~9.2生長,結(jié)核分枝桿菌生長的zui適pH為6.5~6.8。細菌通過細胞膜的質(zhì)子轉(zhuǎn)運系統(tǒng)調(diào)節(jié)細胞內(nèi)的pH。
溫度 各類細菌對溫度的要求不一。藉此分為嗜冷菌,其生長范圍-5℃~30℃,zui適生長為10℃~20℃;嗜溫菌,生長范圍10℃~45℃,zui適20℃~40℃;嗜熱菌,生長范圍25℃~95℃,zui適50℃~60℃。病原菌在長期進化過程中適應人體環(huán)境,均為嗜溫菌,zui適生長溫度為人的體溫,即37℃。細菌與動物或植物一樣,當突然暴露于高出適宜生長溫度的環(huán)境下,可暫時性合成熱休克蛋白(heat-shock proteins,Hsp)。這些蛋白質(zhì)具有耐熱性,因而對菌細胞內(nèi)的熱敏感蛋白質(zhì)起到穩(wěn)定作用。
根據(jù)細菌代謝時對分子氧的需要與否,可以分四類。
1.專性需氧菌(obligate aerobe) 具有*的呼吸酶系統(tǒng),需要分子氧作為受氫體來完成需氧呼吸,僅能在有氧環(huán)境下生長。如結(jié)核分枝桿菌、霍亂弧菌。
2.微需氧菌(microaerophilic bacterium) 在低氧壓(~5%)下生長,氧濃度>10%對其有抑制作用。如空腸彎曲菌、幽門螺桿菌。
3.兼性厭氧菌(facultative anaerobe) 兼有需氧呼吸和無氧發(fā)酵兩種功能,不論在有氧或無氧環(huán)境中都能生長,但以有氧時生長較好。大多數(shù)病原菌屬于此。
4.專性厭氧菌(obligate anaerobe) 缺乏*的呼吸酶系統(tǒng),利用氧以外的其他物質(zhì)作為受氫體,只能在無氧環(huán)境中進行發(fā)酵。有游離氧存在時,不但不能利用分子氧,而且還能受其毒害,甚至死亡。如破傷風梭菌、脆弱擬桿菌。
專性厭氧菌在有氧環(huán)境中不能生長,可能由于下述原因:
(1)缺乏氧化還原電勢(Eh)高的呼吸酶:各種物質(zhì)均有其固有的Eh。在氧化還原過程中,Eh高的物質(zhì)可氧化Eh低的物質(zhì),反之不能。人組織的Eh約為150mV,普通培養(yǎng)基在有氧環(huán)境中Eh可達300mV左右,因此細菌必須具有Eh比它們更高的呼吸酶,如細胞色素和細胞色素氧化酶,才能氧化環(huán)境中的營養(yǎng)物質(zhì)。專性厭氧菌缺乏這類高Eh呼吸酶,只能在120mV以下的Eh時生長,有氧時Eh 高于此值,故不能生長。
(2)缺乏分解有毒氧基團的酶:細菌在有氧環(huán)境中代謝時,常產(chǎn)生具有強烈殺菌作用的超氧陰離子(O2-)和*(H2O2)。需氧菌有超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和觸酶(catalase),前者將超氧陰離子還原成*,后者將*分解為水和分子氧。有的細菌不產(chǎn)生觸酶,而是產(chǎn)生過氧化物酶(peroxidase),將H2O2還原成無毒的水分子。
專性厭氧菌缺乏這三種酶,故在有氧時受到有毒氧基團的影響而不能生長繁殖。
滲透壓 一般培養(yǎng)基的鹽濃度和滲透壓對大多數(shù)細菌是安全的,少數(shù)細菌如嗜鹽菌(halophilic bacterium)需要在高濃度(3%)的NaCl環(huán)境中生長良好。細菌通過補償K+主動轉(zhuǎn)運和帶有正電荷的有機多胺(丁二胺)的補償性分泌來調(diào)節(jié)細胞內(nèi)的滲透壓和離子強度。因此,細菌可以耐受外部較大范圍的滲透壓和離子強度的變化。
二、細菌的生長與繁殖
細菌個體的生長繁殖 細菌一般以簡單的二分裂方式(binary fission)進行無性繁殖。在適宜條件下,多數(shù)細菌繁殖速度很快。細菌分裂數(shù)量倍增所需要的時間稱為代時(generation time),多數(shù)細菌為20~30分鐘。個別細菌繁殖速度較慢,如結(jié)核分枝桿菌的代時達18~20小時。
細菌分裂時菌體首先增大,染色體復制。革蘭陽性菌的染色體與中介體相連,當染色體復制時,中介體一分為二,各向兩端移動,分別將復制好的一條染色體拉向細胞的一側(cè)。接著染色體中部的細胞膜向內(nèi)陷入,形成橫隔。同時細胞壁亦向內(nèi)生長,zui后肽聚糖水解酶使細胞壁肽聚糖的共價鍵斷裂,分裂成為兩個菌細胞。革蘭陰性菌無中介體,染色體直接連接在細胞膜上。復制產(chǎn)生的新染色體則附著在鄰近的一點上,在兩點間形成的新細胞膜將各自的染色體分隔在兩側(cè)。zui后細胞壁沿橫隔內(nèi)陷,整個細胞分裂成兩個子代細菌。
細菌群體的生長繁殖 細菌生長速度很快,一般細菌約20分鐘分裂一次。若按此速度計算,一個細菌經(jīng)7小時可繁殖到約200萬個,10小時后可達10億以上,細菌群體將龐大到難以想象的程度。但事實上由于細菌繁殖中營養(yǎng)物質(zhì)的逐漸耗竭,有害代謝產(chǎn)物的逐漸積累,細菌不可能始終保持高速度的無限繁殖。經(jīng)過一段時間后,細菌繁殖速度漸減,死亡菌數(shù)增多,活菌增長率隨之下降并趨于停滯。
將一定數(shù)量的細菌接種于適宜的液體培養(yǎng)基中,連續(xù)定時取樣檢查活菌數(shù),可發(fā)現(xiàn)其生長過程的規(guī)律性。以培養(yǎng)時間為橫坐標,培養(yǎng)物中活菌數(shù)的對數(shù)為縱坐標,可繪制出一條生長曲線(growth curve)(圖2-1)。
圖2-1 大腸埃希菌的生長曲線
根據(jù)細菌濃度,生長曲線可分為六期,即A~F,其中較重要的四個期分述如下。
1.遲緩期(A) 細菌進入新環(huán)境后的短暫適應階段。該期菌體增大,代謝活躍,為細菌的分裂繁殖合成并積累充足的酶、輔酶和中間代謝產(chǎn)物;但分裂遲緩,繁殖極少。遲緩期長短不一,按菌種、接種菌的菌齡和菌量,以及營養(yǎng)物等不同而異,一般為1~ 4小時。
2.對數(shù)期(C) 又稱指數(shù)期(exponential phase)。細菌在該期處于穩(wěn)定狀況, 生長迅速,活菌數(shù)以恒定的幾何級數(shù)增長,生長曲線圖上細菌數(shù)的對數(shù)呈直線上升,達到狀態(tài)。此期細菌的形態(tài)、染色性、生理活性等都較典型,對外界環(huán)境因素的作用敏感。因此,研究細菌的生物學性狀(形態(tài)染色、生化反應、藥物敏感試驗等)應選用該期的細菌。一般細菌對數(shù)期在培養(yǎng)后的8~18小時。
3.zui大穩(wěn)定期(E) 由于培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)消耗,有害代謝產(chǎn)物積聚,該期細菌繁殖速度漸減,死亡數(shù)緩慢增加,生長分裂和死亡的菌細胞數(shù)處于平衡狀態(tài)。需氧菌限制其生長的因素通常是氧,當細菌濃度超出1×107/ml,生長速率就會下降;達到4~5×109/ml時,即使振蕩培養(yǎng),氧擴散的速度也難以滿足細菌生長的要求。該期細菌形態(tài)、染色性和生理性狀常有改變。一些細菌的芽胞、外毒素和抗生素等代謝產(chǎn)物大多在zui大穩(wěn)定期產(chǎn)生。
4.衰亡期(F) zui大穩(wěn)定期后細菌繁殖越來越慢,死亡數(shù)越來越多,并超過活菌數(shù)。該期細菌形態(tài)顯著改變,出現(xiàn)衰退型或菌體自溶,難以辨認,生理代謝活動也趨于停滯。因此,陳舊培養(yǎng)的細菌難以鑒定。
細菌生長曲線只有在體外人工培養(yǎng)的條件下才能觀察到。在自然界或人類、動物體內(nèi)繁殖時,受多種環(huán)境因素和機體免疫因素的多方面影響,不可能出現(xiàn)在培養(yǎng)基中的那種典型的生長曲線。
細菌的生長曲線在研究工作和生產(chǎn)實踐中都有指導意義。掌握細菌生長規(guī)律,可以人為地改變培養(yǎng)條件,調(diào)整細菌的生長繁殖階段,更為有效地利用對人類有益的細菌。
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