體液免疫功能的檢測

疫球蛋白的定量檢測
　　1．血清免疫球蛋白的測定　血清免疫球蛋白（Ig）的測定是檢查體液免疫功能zui常用的方法。由于目前還沒有發(fā)現(xiàn)由IgD和IgE缺陷所致疾病，所以通常檢測IgG、IgM、IgA，這三類Ig就可以代表血清Ig的水平（表20-2）。檢測發(fā)現(xiàn)三類Ig水平均明顯低下，就可考慮體液免疫缺陷。但在分析兒 免疫細(xì)胞
童Ig水平時，應(yīng)注意Ig的水平隨年齡而變化。體液免疫功能缺陷首先考慮患者血清Ig　水平，如果所有類別Ig水平均降低，即稱為一般性聯(lián)低丙種球蛋白血癥。如果免疫球蛋白水平極度低下，或IgG、IgM、IgA,三類Ig總量低于2mg/ml則稱為嚴(yán)重低丙種球蛋白血癥或無丙種球蛋白血癥（agammaglobulinemia）。如果只一種或兩種Ig水平降低，則稱為異常丙種球蛋白血癥（dysgammaglobulinemia）。一般性低丙種球蛋白血癥多見于繼發(fā)性免疫缺陷病。無丙種球蛋白血癥常見于原發(fā)免疫缺陷病。但是常有約50%IgA缺陷病人無臨床癥狀，伴有反復(fù)感染的IgA缺陷病人常同時有IgG的缺陷。常規(guī)的定量檢測血中Ig的方法是單向免疫擴(kuò)散和免疫比濁法。 　　2．分泌型IgA（SIgA）的測定 SIgA是粘膜抗感染的重要因素，但是粘膜抗感染還包括少量滲出的IgM和IgG，還有細(xì)胞免疫的作用。由SIgA缺陷病人?？蓹z測出針對牛奶或其他食物蛋白的沉淀抗體和自身抗體，說明機體對抗原蛋白質(zhì)吸收異常，同時也存在免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)的功能紊亂。一般來說血清IgA缺陷病人常伴有SIgA缺陷，反之亦然。說明在機體中血清IgA和SIgA之間有某種生物相關(guān)性。zui近也有報導(dǎo)少數(shù)SIgA缺陷病人的血清IgA水平正常，因而分別檢查血清中和分泌液中IgA水平還是有必要的。目前用免疫比濁法可較地測定分泌液中IgA時和IgM和IgC水平。在用單向免疫擴(kuò)散和免疫比濁法定量IgA時，因抗血清是針對這兩型共有的α鏈的，故不能區(qū)分SIgA和血清來源的IgA。而應(yīng)用抗分泌小體的抗體用酶免疫分析法，可區(qū)分血清IgA和分泌型IgA,并可對SIgA進(jìn)行定量。
 

常見抗體的測定
　　　檢測體液免疫功能的另一種方法是定量測定正常人體內(nèi)的幾種常見的抗體水平。常見的抗體通常是指嗜異性凝集素、抗溶血素O抗體以及麻疹病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒的抗體。 　　在嚴(yán)重免疫缺陷病人缺乏上述抗體，常見抗體的缺損可驗證或支持免疫蛋白測定的結(jié)果。然而對于比較復(fù)雜的免疫缺陷，由于這類抗體主要反映過去的免疫應(yīng)答能力，此外這種初次應(yīng)答能力持續(xù)期短，易于消退，所以對新近發(fā)生的繼發(fā)性免疫缺陷的診斷幫助不大。
B細(xì)胞數(shù)目及功能的檢測
　　原發(fā)性免疫缺陷和繼發(fā)性免疫缺陷均可導(dǎo)致體液免疫功能下降。原發(fā)性體液免疫功能缺陷可能由于B細(xì)胞分化障礙，細(xì)胞內(nèi)合成Ig功能紊亂或由于抑制性細(xì)胞功能過強。繼發(fā)性體液免疫功能降低可能由于蛋白質(zhì)大量丟失，蛋白質(zhì)吸收障礙、營養(yǎng)不良、免疫抑制治療的副作用，病毒感染（艾滋?。┑?。在診斷原發(fā)性體液免疫功能缺損中可檢查B細(xì)胞的數(shù)目和功能以確定造成缺損的原因。 　　1．外周血B細(xì)胞數(shù)目的檢測首*行常規(guī)的外周血白細(xì)胞總數(shù)和分類計數(shù)檢查，這些結(jié)果是評價病人免疫系統(tǒng)功能狀態(tài)的基本資料。由于在全血中淋巴細(xì)胞所占比例很少，而T細(xì)胞和B細(xì)胞不能藉形態(tài)學(xué)特征分類，所以外周血B細(xì)胞數(shù)檢測需先從全血分離出富含淋巴細(xì)胞的單個核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell,PBM）。再依靠B細(xì)胞表面有免疫球蛋白分子或其他特征來檢查B細(xì)胞。常用的方法是將待檢者的PBM用FITC標(biāo)記的免疫抗人Ig作直接免疫熒光染色，在熒光顯微鏡下顯熒光的細(xì)胞為帶有表面免疫球蛋白的B細(xì)胞。正常人B細(xì)胞的約占PBM的10%。 　　2．外周血B細(xì)胞功能的檢測 分離受檢者血液PBM細(xì)胞，體外培養(yǎng)時加入B細(xì)胞刺激物如RWM（美洲商陸刺激素）或SAC（金黃色莆萄球菌來源的刺激物）后由B細(xì)胞變成Ig分泌細(xì)胞的數(shù)量。體液免疫功能缺損患者，其PBM對PWM和SACA刺激的反應(yīng)降低，產(chǎn)生Ig分泌細(xì)胞數(shù)正常人顯著減少。在進(jìn)一步檢查這種免疫缺損的原因，則應(yīng)檢查是由B細(xì)胞或TH細(xì)胞缺損所致，還是由于TS細(xì)胞數(shù)量或活性增強引起的。 　　抗體形成細(xì)胞計數(shù)：檢查人類Ig分泌細(xì)胞是用反向溶血空斑檢測（reversed hemolytic　plaque assay）法。將待檢人的PBM、用SPA包被的SRBC（SPA-SRBC）、兔抗人Ig抗體、補體四種成分混合，灌入用兩張玻片做成的小室，密封好，放入溫箱培養(yǎng)1-3小時，，在此期間，作為抗人Ig抗體的免疫IgG的FC段可與SRBC表面SPA結(jié)合，當(dāng)Ig分細(xì)胞分泌出游離的Ig分子時，這些人Ig分子與SRBC表面的抗人Ig抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物，即可活化補體，使SPA-SRBC溶解，因此在Ig分泌細(xì)胞周圍形成一個圓形的溶血區(qū)，稱為溶血空斑，每一個溶血的空斑就代表一個Ig分泌細(xì)胞。 　　檢查小鼠Ig分泌細(xì)胞應(yīng)用的溶血空斑試驗比較簡單，即SRBC免疫注射小鼠，4天后取脾制成單個細(xì)胞懸液，加入一定量SRBC（靶細(xì)胞）混合，在補體參加下，產(chǎn)生抗體的細(xì)胞分泌出的Ig與SRBC（抗原）結(jié)合在補體作用下，溶血，表現(xiàn)肉眼可見的溶血空斑。計數(shù)空斑數(shù)代表分泌抗體的細(xì)胞數(shù)。