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熒光原位雜交技術(shù)技術(shù)原理 是將熒光素直接或間接標(biāo)記的核酸探針[或生物素、dinit rophenyl(I)NP)aminoacetylAAFfluorine(AAF)等標(biāo)記的核酸探針與待測樣本中的核酸序列按照堿基互補(bǔ)配對的原則進(jìn)行雜交,經(jīng)洗滌后直接在熒光顯微鏡下觀察。
熒光原位雜交技術(shù)是一種重要的非放射性原位雜交技術(shù),原理是利用報告分子(生物素)標(biāo)記核酸探針,然后將探針與染色體或DNA纖維切片上的靶DNA雜交,若兩者同源互補(bǔ),即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。此時可利用該報告分子與熒光素標(biāo)記的特異親和素之間的免疫化學(xué)反應(yīng),經(jīng)熒光檢測體系在鏡下對待DNA進(jìn)行定性、定量或相對定位分析。
與其他原位雜交技術(shù)相比,熒光原位雜交具有很多優(yōu)點(diǎn),主要體現(xiàn)在:
①FISH不需要放射性同位素標(biāo)記,更經(jīng)濟(jì)安全。
②FISH的實(shí)驗(yàn)周期短,探針穩(wěn)定性高,特異性好,定位準(zhǔn)確,能迅速得到結(jié)果。
③FISH通過多次免疫化學(xué)反應(yīng),使雜交信號增強(qiáng),靈敏度提高,其靈敏度與放射性探針相當(dāng)。
④多色FISH通過在同一個核中顯示不同的顏色可同時檢測多種序列。
⑤既可以在玻片上顯示中期染色體數(shù)量或結(jié)構(gòu)的變化。也可以在懸液中顯示間期染色體DNA的結(jié)構(gòu)。
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