我們在進行細胞培養(yǎng)實驗過程中易受到較多因素影響，導致支原體污染，對此就要對其進行支原體檢測，排除被污染的可能，就需要借助相關的檢測技術進行支原體檢測，那么支原體檢測方法有哪些？常用的是直接培養(yǎng)法、DNA熒光染色法，酶聯(lián)免疫吸附試驗，PCR檢測法等方法進行檢測。

1. 直接培養(yǎng)法。

直接培養(yǎng)法是檢測支原體的標準方法。是把樣品接種到支原體培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，并通過觀察液體培養(yǎng)基的顏色變化或是固體培養(yǎng)基上是否生長支原體菌落進行判斷，但培養(yǎng)法所需培養(yǎng)時間較長，要3～4周左右的時間，其次用培養(yǎng)法不能在同一培養(yǎng)基中檢測出所有的支原體類型，該方法常用于對種毒或疫苗成品的支原體檢測。

2. DNA熒光染色法。

DNA熒光染色法，是把要檢測的樣品接種在指示細胞中進行培養(yǎng)，然后用特異性熒光染料進行染色，再用熒光顯微鏡進行觀察，通過附著在細胞表面的支原體DNA的著色情況判斷該樣品是否被支原體污染。該方法用時短，可進行多個樣品檢測，還能檢測出使用直接培養(yǎng)法難以檢測出的支原體類型。根據(jù)研究發(fā)現(xiàn)DNA熒光染色法比直接培養(yǎng)法更為敏感、方便，耗時短、準確穩(wěn)定。

3. 酶聯(lián)免疫吸附試驗。

酶聯(lián)免疫吸附試驗即ELISA檢測法，對診斷支原體是較方便和準確的方法之一，常見的ELISA檢測法有間接法和抗原競爭法等，檢測支原體都有較好的特異性及敏感性，并且可以一次性進行多樣品檢測，并且成為檢測支原體的常規(guī)方法之一，一般是通過比色法得出相應的結果進一步來判定是否有支原體污染的情況。

4. 聚合酶鏈式反應（PCR）檢測法。

PCR方法是一種DNA復制的體外擴增方法，由于支原體生長緩慢對營養(yǎng)環(huán)境要求較高，對支原體直接培養(yǎng)法檢測還有一定局限性，而PCR檢測法相對于直接培養(yǎng)法更為快速、敏感。其中的巢式PCR檢測法是在普通PCR檢測方法上進行優(yōu)化改進的，通過巢式PCR引物擴增后存在的目的片段情況進行合理判斷，并可以對支原體類型進行準確的分析及判斷，進一步對污染源進行判斷。

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