培養(yǎng)基在使用過(guò)程中應(yīng)該注意什么？

1.培養(yǎng)基的滅菌

一般培養(yǎng)基可采用121℃ 高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法。在各種培養(yǎng)基制備方法中，如無(wú)特殊規(guī)定，即可用此法滅菌。某些畏熱成分，如糖類(lèi)，應(yīng)另行配成20% 如或更高的濃液，以過(guò)濾或間歇滅菌法消毒，以后再用無(wú)菌操作技術(shù)、定量加于培養(yǎng)基。明膠培養(yǎng)基亦應(yīng)用較低溫度滅菌。血液、體液和抗生素等則應(yīng)從無(wú)菌操作技術(shù)抽取和加入于經(jīng)冷卻約50℃ 左右的培養(yǎng)基中。

瓊脂斜面培養(yǎng)基應(yīng)在滅菌后立即取出、待冷至55-60℃時(shí)，擺置成適當(dāng)斜面、待其自然凝固。已配制好的培養(yǎng)基必須及時(shí)滅菌（在2小時(shí)內(nèi)），避免微生物生長(zhǎng)繁殖而消耗養(yǎng)分，改變培養(yǎng)基的酸堿度。高溫可破壞培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分，還會(huì)使瓊脂的凝膠強(qiáng)度下降，因此必須嚴(yán)格控制滅菌溫度和時(shí)間，并且不可重復(fù)滅菌。

2.培養(yǎng)基的使用應(yīng)在有效期內(nèi)，不同批號(hào)的培養(yǎng)基不要混合使用

干粉培養(yǎng)基應(yīng)保存在陰涼干燥處，要避譽(yù)首免陽(yáng)光直射；未開(kāi)瓶的培養(yǎng)基在室溫下的可以保存2年，開(kāi)瓶后的干粉培養(yǎng)基易吸濕，應(yīng)注意防潮并在6個(gè)月內(nèi)用完。應(yīng)定期對(duì)儲(chǔ)存中的培養(yǎng)基進(jìn)行常規(guī)檢查，如容器密閉性復(fù)查、開(kāi)封日期、內(nèi)容物的感官檢查，如果培養(yǎng)基發(fā)生結(jié)塊、顏色異常和其他變質(zhì)跡象就不能再使用。

3.培養(yǎng)基的保存

滅菌以后培養(yǎng)基應(yīng)該迅速冷卻至所需溫度，避免長(zhǎng)時(shí)間保存在滅菌鍋內(nèi)，造成過(guò)度滅菌，影響培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分或選擇性效果。所配制的培養(yǎng)基的量，應(yīng)該是在最長(zhǎng)保存期限內(nèi)正好使用完(2-25℃避光的環(huán)境，若保存于非密封容器，3周內(nèi)使用，密閉容器可使用一年----2010版藥典規(guī)定。）含染料的培養(yǎng)基應(yīng)閉光保存；倒好的瓊脂平板如果配制的當(dāng)天未使用完，應(yīng)于冷藏保存，如果保存時(shí)間超過(guò)2天，應(yīng)將其放入密封的塑料袋中保存；配好的肉湯類(lèi)培養(yǎng)基如果保存時(shí)間超過(guò)2個(gè)星期，應(yīng)將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止態(tài)鏈蒸發(fā)。

4..購(gòu)置培養(yǎng)基時(shí)要求供應(yīng)商提供產(chǎn)品質(zhì)控證書(shū)

使用前要先對(duì)外觀(guān)、批號(hào)、pH 值、滅菌要求、選擇性等進(jìn)行初步評(píng)估。

5.培養(yǎng)基的配制

使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中，使細(xì)菌不易生長(zhǎng)。盡量使用不銹鋼鍋加熱溶化，也可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動(dòng)蒸汽消毒器中蒸煮溶化。容器的大小需大于復(fù)水后培養(yǎng)基總體積的2倍以上，避免在加熱溶解過(guò)程中，培養(yǎng)基溢出；含有瓊脂粉的培養(yǎng)基，在加熱溶解之前可以浸泡數(shù)分鐘；加熱培養(yǎng)基時(shí)一定要進(jìn)行攪拌，特別是瓊脂類(lèi)培養(yǎng)基。為避免燒焦和沸騰溢出，對(duì)于少量的培養(yǎng)基盡量使用沸水浴進(jìn)行加熱。在鍋中溶化時(shí)、可先用溫水加熱并隨時(shí)擾動(dòng)，以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備。待大部分固體成分溶化后，再用較小火力使所有成分溶化，迄至煮沸。在加熱溶化過(guò)程中，因蒸發(fā)而丟失的水分，最后必須加以補(bǔ)足。

6.培養(yǎng)基的性能測(cè)試

①外觀(guān)。控制制備好的培養(yǎng)基應(yīng)有相應(yīng)的顏色，一般的培養(yǎng)基應(yīng)澄清、無(wú)渾濁、無(wú)沉淀。使用前應(yīng)檢查培養(yǎng)基的顏色是否發(fā)生變化，是否蒸發(fā)／脫水。

②pH測(cè)定  

微生物必須在適宜的pH范圍內(nèi)才能正常生長(zhǎng)繁殖或體現(xiàn)其生物特性。培養(yǎng)基配方要求的pH為滅菌或消毒后的pH 值，即培養(yǎng)基使用前的pH，并應(yīng)在25℃溫帆虛孫度下采用精密酸度計(jì)進(jìn)行測(cè)量，固體瓊脂培養(yǎng)基應(yīng)以特殊的膠體表面測(cè)量電極進(jìn)行測(cè)量。使用過(guò)程中，如果需要調(diào)整培養(yǎng)基的pH，應(yīng)用1mol/L  Na0H或 lmol/L  HCL調(diào)整，注意不可反復(fù)調(diào)pH，否則會(huì)影響培養(yǎng)基的滲透壓。

③污染控制 從每批制備好的培養(yǎng)基中選取部分進(jìn)行污染測(cè)試(無(wú)菌試驗(yàn))，確定無(wú)微生物生長(zhǎng)方可使用。

④性能測(cè)試 可按2010版藥典附錄微生物限度檢查法及無(wú)菌檢查法中的規(guī)定進(jìn)行適用性檢查。

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