細(xì)胞周期操作步驟

來源：上海邦景實(shí)業(yè)有限公司 2025年05月14日 15:55

細(xì)胞周期指細(xì)胞一個(gè)世代所經(jīng)歷的時(shí)間。從一次細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個(gè)周期。細(xì)胞周期反應(yīng)了細(xì)胞增殖速度。

操作步驟：

1、細(xì)胞生長至指數(shù)期時(shí)，向培養(yǎng)液中加入BrdU，使終濃度為10μg/ml。

2、44小時(shí)加秋水仙素，使每ml中含0.1μg。

3、48小時(shí)后常規(guī)消化細(xì)胞至離心管中，注意培養(yǎng)上清的漂浮細(xì)胞也要收集到離心管中。

4、常規(guī)染色體制片（見第三部分：染色體技術(shù)）。

5、染色體玻片置56℃水浴鍋蓋上，鋪上2×SSC 液，距紫外燈管6cm處紫外照射30分鐘。

6、棄去2×SSC液，流水沖洗。

7、Giemsa液染色10分鐘，流水沖洗，晾干。

8、鏡檢100個(gè)分裂相，計(jì)、二、三、四細(xì)胞期分裂指數(shù)。

9、計(jì)算：細(xì)胞周期（Tc）=48/{（M1+2M2+3M3+4M4）/100}（小時(shí)）

附：（1）BrdU配制: BrdU 10mg十雙蒸水10ml 4℃下避光保存。

（2）2×SSC配制: NaCl 1.75克，檸檬酸三鈉•2H2O 0.88克，加水至100ml，4℃保存。

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