加標(biāo)回收率是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部常用的質(zhì)量控制技術(shù)，用于驗(yàn)證分析方法和操作過(guò)程的準(zhǔn)確性和可靠性。它通過(guò)在樣品中加入已知量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（即“加標(biāo)”），然后測(cè)定其被檢測(cè)出的比例來(lái)計(jì)算回收率。理想的回收率通常在90%～110%之間。

操作步驟詳解

1、樣品準(zhǔn)備：

確保樣品（如血清、血漿、細(xì)胞上清液等）在采集后迅速處理，避免溶血或污染，影響結(jié)果。

樣品應(yīng)按要求稀釋，通常需要使用樣品稀釋液進(jìn)行適當(dāng)倍數(shù)的稀釋。

樣品應(yīng)在2-8℃保存不超過(guò)一周，長(zhǎng)期保存需置于-20℃。

2、試劑準(zhǔn)備：

使用前將所有試劑恢復(fù)至室溫，包括濃縮洗滌液應(yīng)按說(shuō)明書稀釋使用。

確保洗滌液無(wú)沉淀，如有沉淀需充分溶解后使用。

3、實(shí)驗(yàn)檢測(cè)：

使用ELISA試劑盒同時(shí)測(cè)定基礎(chǔ)樣本和加標(biāo)樣本，每個(gè)樣本至少重復(fù)3次，取均值作為測(cè)定濃度。

4、加標(biāo)方法選擇：

?前處理時(shí)加標(biāo)?：適用于基質(zhì)效應(yīng)小的樣本，需對(duì)同一樣本的高、中、低濃度回收率取平均值。

?前處理后加標(biāo)?：可避免前處理干擾，需取3個(gè)不同樣本，每個(gè)樣本做平行樣，低濃度取3個(gè)樣本回收率的平均值。

5、?回收率計(jì)算：?

?公式?：回收率 = (測(cè)定回收樣本濃度均值 - 測(cè)定基礎(chǔ)樣本濃度均值) / 加入濃度 × 100%。

?合格標(biāo)準(zhǔn)?：平均回收率應(yīng)在80%-120%之間，板內(nèi)/板間變異系數(shù)（CV）分別<10%和<15%。

6、關(guān)鍵注意事項(xiàng)

為確保結(jié)果有效，必須遵守以下原則：

加標(biāo)物形態(tài)：應(yīng)與待測(cè)物的化學(xué)形態(tài)相同（如離子態(tài)、分子態(tài)）。

加標(biāo)量大小：盡量與樣品中待測(cè)物含量相近，一般為0.5～2倍，不超過(guò)3倍。

加標(biāo)體積：宜小，一般不超過(guò)原始試樣體積的1%，避免改變基質(zhì)。

加標(biāo)時(shí)機(jī)：最好在樣品前處理前加標(biāo)，使其經(jīng)歷全過(guò)程。

濃度控制：加標(biāo)后總濃度不應(yīng)超過(guò)方法測(cè)定上限的90%。

為了提高加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)的可靠性，推薦每批樣品隨機(jī)抽取10%～20%進(jìn)行測(cè)試。同時(shí)，應(yīng)確保所有儀器已校準(zhǔn)、操作規(guī)范統(tǒng)一，以減少人為誤差。若回收率異常，應(yīng)重點(diǎn)檢查樣品前處理是否充分、標(biāo)準(zhǔn)溶液配制是否準(zhǔn)確以及是否存在交叉污染等問(wèn)題。