公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!
產(chǎn)品介紹:
一步法miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒
描述:由于 miRNAs 分子序列較小,僅 20nt 左右,沒(méi)有 真核生物有的 Poly(A)尾巴結(jié)構(gòu),采用傳統(tǒng) Oligo dT 引 物和隨機(jī)引物很難獲得從 miRNA 到 cDNA 的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn) 物。 公司開(kāi)發(fā)出一套全新的加 A 法 miRNA 反轉(zhuǎn) 錄試劑盒,基于 Peter 改良的 miR-Q 技術(shù), 可以對(duì)成熟的 miRNA 同時(shí)完成加 A 反應(yīng)和反轉(zhuǎn)錄反應(yīng), 直接獲得含有特異性 tag 和 15(T)的 cDNA 產(chǎn)物(如圖 1 所示)。該方法使得 miRNA 反轉(zhuǎn)錄與 mRNA 的反轉(zhuǎn)錄一 樣輕松。直接將提取的 miRNA 與反應(yīng)緩沖液混合物混合, 并置于 PCR 儀上 1 小時(shí)即可獲得高濃度的、包含所有 miRNAs 分子的 cDNA 產(chǎn)物。獲得的 cDNA 產(chǎn)物適用于 HG miRNA 熒光定量 PCR 試劑盒進(jìn)行定量檢測(cè),該方法 已被大量文獻(xiàn)所采用。
儲(chǔ)存:請(qǐng)置于-20°C,可保存 2 年;避免反復(fù)凍融
操作方法
1. 按以下組分配制反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液
miRNA(0.01-0.1 μg)or Total RNA 0.1-2 μg
4×One step miRNA RT Solution 5 μl
*10×miRNA RT Primer 2 μl
Rnase Free H2O Up to 20 μl
*特別說(shuō)明: 10×miRNA RT Primer 引物為
5’-CAGGTCCAGTTTTTTTTTTTTTTTVN-3’,定量擴(kuò)增
用特異性上下游引物進(jìn)行擴(kuò)增,圖 2 是以 hsa-miR-21 為
實(shí)例說(shuō)明特異性上下游引物的設(shè)計(jì)方法
2. 在 PCR 儀上按以下條件進(jìn)行反應(yīng):
37°C 60min
95°C 5min
3. 獲得 cDNA 產(chǎn)物后使用 HG miRNA 熒光定量 PCR 試劑盒進(jìn)行 miRNA 定量檢測(cè)。



公司正在出售的產(chǎn)品:
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