培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
中文名稱:電鏡脫鈣液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100ml|500ml
貨號:FS-X9996
產(chǎn)品介紹:
用途: 骨組織標(biāo)本的電鏡脫鈣 注意事項: 主要由EDTA等組成。密質(zhì)骨3-4周,松質(zhì)骨7-10天。 儲存條件:室溫,12個月 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
球孢白僵菌克侖特羅/抗體Human α1-AT(Alpha 1-Antitrypsin) 人角蛋白18-M30(CK 18-M30)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌斯氏亞種6號染色體開放閱讀框151抗體Human α2-AP(α2-Antiplasmin) 人角蛋白18(CK-18)免疫試劑盒
秦氏蜜環(huán)菌15號染色體開放閱讀框52抗體Human αHSP(Alpha-Hemoglobin Stabilizing Protein) 人間粘附分子3(ICAM-3/CD50)免疫試劑盒
嗜鹽擬諾卡氏菌2號染色體開放閱讀框89抗體Human β-actin(Beta actin) 人間粘附分子2(ICAM-2/CD102)免疫試劑盒
瘦弱鹽扁平菌BCL10結(jié)合蛋白和激活核轉(zhuǎn)錄因子抗體Human ACP(Acid phosphatase) 人間粘附分子1(ICAM-1/CD54)免疫試劑盒
相思根瘤菌凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白15抗體Human MBP(myelin basic protein) 人性T淋巴相關(guān)抗原4(CTLA-4/CD152)免疫試劑盒
美澳型核果褐腐病菌慢性淋巴白血病缺失基因6蛋白抗體Human SOCS4(Suppressor Of Cytokine Signaling 4) 人相關(guān)蛋白A(CagA)抗體(IgG)免疫試劑盒
曲霉13號染色體開放閱讀框38抗體Human AA(Arachidonic Acid) 人相關(guān)蛋白A(CagA)免疫試劑盒
白僵菌14號染色體開放閱讀框140抗體Human VASPIN(Visceral Adipose Specific Serine Protease Inhibitor) 人凋亡相關(guān)斑點樣蛋白(PYCARD)免疫試劑盒
溶壁(lywallzyme)陽離子轉(zhuǎn)運調(diào)節(jié)樣蛋白2抗體Human VEGF165(Vascular Endothelial Growth Factor165) 人硒結(jié)合蛋白1(SELENBP1)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌15號染色體開放閱讀框62抗體Human VEGF-B(Vascular Endothelial Cell Growth Factor B) 人硒蛋白P(SEPP1)免疫試劑盒
美澳型核果褐腐病菌15號染色體開放閱讀框41抗體Human VIL1(Villin 1) 人戊型肝炎病抗體(IgM)免疫試劑盒
大腸埃希菌環(huán)核陽離子通道蛋白α2抗體Human VEGF-D(Vascular Endothelial Growth Factor D) 人戊型肝炎病抗體(IgG)免疫試劑盒
宋氏志賀氏菌鈣連蛋白抗體Human τPK1(Tau-Protein Kinase) 人戊糖(Pentosidine)免疫試劑盒
恥垢分枝桿菌二氫嘧啶相關(guān)蛋白2抗體Human TPA(Tissue Polypeptide Antigen) 人舞蹈病蛋白相互作用蛋白1(HIP1)免疫試劑盒
深綠木霉色P450ⅡE1抗體Human TPS(Tryptase) 人五聚3(PTX3)免疫試劑盒
綠色木霉Trichoderma│viride 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRDickkopf 3試劑盒格列喹
多粘類芽胞桿菌Paenibacillus│polymyxa 質(zhì)量規(guī)格:BRDickkopf 1試劑盒
頂孢霉屬Acremonium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BCDicer-1 枸橘
電鏡脫鈣液德爾布有孢酵母 Trospium chloride梅抗體
釀酒酵母 Lacidipine乙型肝炎病抗體
腐殖質(zhì)鏈霉 Ondansetron Hydrochloride Dihydrate脫氫抗壞血
絲衣霉 AZD4547尿
美澳型核果褐腐病 CTAP線粒體膜通道孔
阿克蘇海洋桿 4-乙酰氨基-5--2-羥基甲酯銜接蛋白
綠色木霉 LDK378乙脫氫2
阮氏 2,3,6-三馬爾堡病IgG抗體
枯草芽孢桿 Kinetensin馬爾堡病IgM抗體
構(gòu)巢曲霉 2-仲丁基-3-甲氧基吡肌加氧
殼 DMT-dC(bz)亞磷酰單體CD82分子
巴斯德酵母 N-乙酰乙酰基對Afamin蛋白
博伊丁假絲酵母 2,6-二異基萘洛絲蛋白
史氏芽孢桿 Daclatasvir (BMS-790052)中部前心鈉肽
長枝木霉 Cobicistat (GS-9350)氧化
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

































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