產(chǎn)品介紹:
英文名稱(chēng):Wortmannin 產(chǎn)品規(guī)格:0.5mg :19545-26-7 分子量:428.43 儲(chǔ)存:-20℃,有效期12個(gè)月。 別名:KY 12420 描述:Wortmannin 是PI3K 抑制劑,IC50為3nM,抑制自噬體的形成,也有效抑制DNA-PK/ATM,IC50分別為16nM 和150nM. |
中文名稱(chēng):Wortmannin(PI3K抑制劑)
英文名稱(chēng):Wortmannin
產(chǎn)品規(guī)格:0.5mg
貨號(hào):FS-X10233
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
滑菇熱休克蛋白β7抗體Human SPACA1 大鼠超敏熱休克蛋白70(HSP-70)免疫試劑盒
缺陷短波單胞菌/鈉超化激活環(huán)核門(mén)控通道蛋白3抗體Human SPDYA 大鼠超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)免疫試劑盒
毛木耳鐵調(diào)節(jié)蛋白25抗體Human SPHK1 大鼠腸脂肪結(jié)合蛋白(iFABP)免疫試劑盒
大腸桿菌HD域內(nèi)含蛋白2抗體Human CADM3(Cell adhesion molecule 3) 大鼠叉頭框蛋白P3(FoxP3)免疫試劑盒
聚生殼菌艾滋病病p55抗體Human SPHK1-Phospho-Ser225 大鼠層粘連蛋白亞基γ-2(LAMC2)免疫試劑盒
芽孢桿菌造血激抗體Human SPHK2 大鼠層粘蛋白α1(LAMA1)免疫試劑盒
禾生HEAT重復(fù)內(nèi)含蛋白5B蛋白抗體Human SPI1 大鼠層連蛋白/板層(LN)免疫試劑盒
緊密帚枝霉缺氧誘導(dǎo)基因1B蛋白抗體Human SPATA1 大鼠不對(duì)稱(chēng)二甲基精(ADMA)免疫試劑盒
三葉草根瘤菌乙?;M蛋白H4抗體Human SPATA13 大鼠補(bǔ)體因子H(CFH)免疫試劑盒
釀酒酵母熱休克蛋白B2抗體Human SPATA16 大鼠補(bǔ)體因子D(adipsin)(CFD)免疫試劑盒
根瘤菌人類(lèi)白抗原B27Human SPAG4 大鼠補(bǔ)體片斷5a(C5a)免疫試劑盒
草地阿格雷氏菌螺旋環(huán)螺旋轉(zhuǎn)錄因子HATH6抗體Human SOX5 大鼠補(bǔ)體片斷5(C5)免疫試劑盒
孢淡灰鏈霉菌神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1β2抗體Human SOX6( SRY-box 6) 大鼠補(bǔ)體片斷3a(C3a)免疫試劑盒
尖孢鐮刀菌HDHD3蛋白抗體Human SOX8 大鼠補(bǔ)體片斷3(C3)免疫試劑盒
平田頭菇7-2HEATR3蛋白抗體Human SOX7 大鼠補(bǔ)體蛋白4(C4)免疫試劑盒
肉葡萄球菌(可訂)癌增強(qiáng)蛋白抗體Human SP100 大鼠補(bǔ)體蛋白3(C3)免疫試劑盒
魯氏不動(dòng)桿菌Acinetobacter│lwoffii 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)格列風(fēng)內(nèi)酯
叢毛紅曲菌Monascus│pilosus 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品紫草
莫格球擬酵母Torulopsis│mogii 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98.5%(GC)菝葜皂元
Wortmannin(PI3K抑制劑)黃孢紫紅菇 4-氟-3-基苯尼克酰磷核糖轉(zhuǎn)移
齊藤隱球酵母 三吡啶鈉環(huán)氧二十碳三烯
寡氧單胞 1,1,1-三氟異C1q腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白4
蠟樣芽孢桿 三氟化-甲溶液KI67抗原
金針菇F39 3-吡啶去乙?;?/span>
根瘤 偏磷異檸檬脫氫2
紅色鹽顆粒形 環(huán)戊烷四羧巨病IgG抗體
籬邊粘褶 3-氨基-4,4,4-三氟巴豆乙酯白血病抑制因子
松鼠葡萄球松鼠亞種 2-氨基嘧啶鹽鹽賴(lài)氫吡啶啉
酮丁梭(酮丁桿) 鹽黃酮哌酯17α羥化
釀酒酵母 3,5-二-4-氨基苯乙酮20α羥化
黃綠木霉 5-(磺?;?-2-氟P21蛋白
蘇云金芽孢桿 2-甲基丁酯膽固24S-羥化
蝙蝠蛾擬青霉 Cbz-L-谷 1-芐酯CD47分子
5#---3號(hào)(梨形灰包) 4-三氟甲硫基-1,2-苯二肌糖

































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