產(chǎn)品介紹:
Dacomitinib是一種特異性的不可逆抑制劑ERBB家族抑制劑,作用于EGFR,ERBB2和ERBB4,IC50分別為6nM,45.7nM和73.7nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1110813-31-4 別名:PF-00299804;PF-299804 純度:99.91% 分子量:469.94 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
英文名稱:Dacomitinib
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg
貨號:FS-X10568
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
棕黑腐質(zhì)霉花生四烯15脂氧合2抗體Anti-NOGOR(RTN4R) Antibody腦膜瘤基因1(MN1)
毛腿環(huán)銹傘硫氧還蛋白還原抗體Anti-Nogo A/RTN4 Antibody腦富含膜附著信號蛋白1(BASP1)
球孢白僵菌5-羥色受體2C抗體Anti-NOL3 Antibody腦啡肽2(NEP2)
蕈狀芽孢桿菌5-羥色受體5B抗體Anti-NONO Antibody腦啡肽(NEP)
黑曲霉絲/精相關(guān)核基質(zhì)蛋白4抗體Anti-NOS1 Antibody腦多巴神經(jīng)營養(yǎng)因子(CDNF)
維及尼鏈霉菌絲/精相關(guān)核基質(zhì)蛋白3抗體Anti-NOS1 Antibody腦蛋白44樣蛋白(BRP44L)
曲霉磷化絲/蘇蛋白激II β(casein kinase IIβ)抗體Anti-non-muscle Myosin IIB/MYH10 Antibody腦蛋白44(BRP44)
四川散斑殼單核蛋白5抗體Anti-NOS2 Antibody囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)因子(CFTR)
健康皮張抗原SAMD9蛋白抗體Anti-NOS2 Antibody囊泡乙酰轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(VAChT)
尖孢鐮刀菌SARM1蛋白抗體Anti-NOS3 Antibody囊泡單轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(VMAT2)
間型彎孢染色質(zhì)組裝因子1P155抗體Anti-NOTCH1 Antibody耐氧化性能蛋白1(OXR1)
鏈格孢蛙皮降壓肽抗體Anti-NOTCH2 Antibody耐扭蛋白3A(TOR3A)
哈茨木霉信號誘導(dǎo)增殖相關(guān)蛋白1樣蛋白2抗體Anti-NOTCH1 Antibody耐扭蛋白2A(TOR2A)
滑菇、光帽黃傘DNA聚合δ相互作用蛋白3抗體Anti-NOTCH4 Antibody耐扭蛋白1B(TOR1B)
橙色綠屈擾菌絲/蘇蛋白激SRPK2抗體Anti-NOVA1 Antibody耐扭蛋白1A(TOR1A)
猴頭分化蛋白SEPT8抗體Anti-NOVA2 Antibody鈉協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(NCCT)
視神經(jīng)相關(guān)蛋白1抗體簡單芽孢桿菌人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物
螺旋轉(zhuǎn)錄因子OTP抗體玫瑰色孫修琴菌人臍動脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物
少突膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子3抗體綠針假單胞菌橙色亞種人大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物
嗅覺受體家族5亞基1抗體嗜鹽螺旋桿菌人主動脈平滑肌細(xì)胞提取物
ERBB家族抑制劑(Dacomitinib)三葉草根瘤 3-氟-4-甲氧基苯鐵蛋白
Acinetobacter soli 雙(六氟乙基酮)合鎳(II),水合磷肌激
少根根霉原變種 甲次硫鈉 水合物病性關(guān)節(jié)炎抗體
異常漢遜酵母 3-磺基十四烷基二甲基網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥病抗體
野牡丹尼爾氏酵母 亞鈣水合物可溶性Toll樣受體4
球孢白僵 鹽芐絲肼整合β1
大腸桿 化鈥(III)六水合物纖調(diào)蛋白
芽孢桿 反式二氨基二化鉑(II), Pt minE鈣粘著蛋白;上皮性鈣黏附蛋白
黑曲霉 磷鑭(III) 水合物 (REO)拓?fù)洚悩?gòu)2
佛雷德里克斯堡假單胞 2-羧基苯鈣結(jié)合蛋白
釀酒酵母 3,5-二甲基-4- 硝基吡啶-2-甲β-骨膠原交聯(lián)
芹側(cè)耳(杏鮑菇) 乙二四乙鐵鈉鹽纖維蛋白
枯草芽孢桿 三氟磺鋱(III)水合物纖連蛋白
大腸埃希氏 Fmoc--4-甲不飽和脂肪
薄花邊傘 鹽伊伐布雷定神經(jīng)肽Y

































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