試劑配制

① 緩沖液：將緩沖液試劑袋中的試劑倒出，溶于500ml 蒸餾水中，溶解、混勻即可。

② 底物：按需添加的底物量，向標(biāo)有“底物”的試劑瓶中加入蒸餾水溶解、混勻即可。0~5oC環(huán)境下冷藏保存。

底物添加量為20ul時，應(yīng)往標(biāo)注為底物的瓶中加入2.7ml蒸餾水；

底物添加量為100ul時，應(yīng)往標(biāo)注為底物的瓶中加入13ml蒸餾水。

③ 顯色劑：無需配制放入冰箱冷藏（0~5℃），切勿冷凍結(jié)冰。

④ 酶試劑：酶試劑已配成溶液可直接使用。平常要在0~5oC環(huán)境條件下冷藏保存，切勿冷凍至結(jié)冰?。?！

操作步驟

1.樣品前處理：

(1 (1) ①植株：稱取2g樣品（葉菜剪成寬度為1厘米的菜樣，塊根菜取1厘米左右的表皮樣品）放入三角瓶中，加入10ml緩沖液后，振蕩提取2分鐘；

②茶葉：稱取0.5g茶葉樣品，加入5ml丙酮，振蕩提取5分鐘；取0.2ml上述丙酮溶液，40~50℃水浴蒸干；加入2.5ml緩沖液，振蕩2分鐘；（自備丙酮）

(2) 若浸提液清澈無色或顏色較淺，取上清液待測；

若浸提液混濁，離心，取上清液待測；

若浸提液色素干擾嚴(yán)重，可用活性炭脫色，具體方法如下：

將浸提液轉(zhuǎn)移至另一個三角瓶中，加入0.1~0.5g活性碳(根據(jù)顏色深淺調(diào)整)，水浴70℃加熱5分鐘，取出趁熱過濾，濾液待測。

[備注]：蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中含有對酶有影響的植物次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽性。處理這類樣品時，可采取整株（體）浸提，避免次生物物質(zhì)干擾。

2.檢測樣品的制備：

(1) 空白對照液:

①取酶100ul，緩沖液2.5ml，加入反應(yīng)瓶中，混勻靜置10分鐘后，再加入顯色劑100ul。

②加入底物20ul（或100ul）；

③搖勻后立即測試。

(2) 檢測樣品液:

①取酶100ul，待測樣品液2.5ml，加入反應(yīng)瓶中，混勻靜置10分鐘后，再加入顯色劑100ul。

②加入底物20ul（或100ul）；

③搖勻后立即測試。

3 檢測樣品測試：

(1) 空白對照測量：

① 取2.5ml對照樣品于比色皿中；

② 將比色皿放入的通道中；

③ 按“對照”鍵，屏幕下方顯示測量時間；

④ 檢測結(jié)束后，儀器自動顯示對照樣品的測試結(jié)果△Ao。

[備注]：a 當(dāng)空白對照值在0.15-0.3之間時，可繼續(xù)做實驗；

   b 當(dāng)空白對照值在＜0.15時，需重做空白對照，若重復(fù)多次的空白對照值＜0.15時，必須更換酶試劑。

c 當(dāng)空白對照值在＞0.3時,要調(diào)試減少儀器的測量時間，重新做空白對照。

(2) 樣品測量：

① 取2.5ml待測樣品于比色皿中；

② 將比色皿放入的通道中；

③ 按“樣品”鍵，屏幕下方顯示測量時間；

④ 檢測結(jié)束后，儀器自動顯示通道檢測樣品的測試結(jié)果△Ai。

判斷標(biāo)準(zhǔn)

(1) 樣品的抑制率在40~50%之間為可疑農(nóng)殘超標(biāo)樣品；

(2) 抑制率＞50%為農(nóng)殘超標(biāo)樣品，表明被測樣品的農(nóng)藥殘留毒性可能超過安全的界定標(biāo)準(zhǔn)，建議用氣相色譜等儀器分析法作進(jìn)一步確認(rèn)。

注意事項

   ①  加入底物后，應(yīng)迅速混勻，立即測試。

   ②  測試前根據(jù)需添加底物的量對底物進(jìn)行稀釋：

   ③  所用的檢測液對皮膚均具有不同程度的傷害，使用時請做好防護(hù)。不慎沾到皮膚應(yīng)立即擦干并用大量水沖洗。

檢測試劑請務(wù)必在2~4℃冰箱保存。