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H輔酶ⅠNAD測(cè)試劑盒微量法

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  • 型號(hào)
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  • 更新時(shí)間2022-04-07
  • 廠商性質(zhì)經(jīng)銷(xiāo)商
  • 入駐年限第9年
  • 實(shí)名認(rèn)證已認(rèn)證
  • 產(chǎn)品數(shù)量9985
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H輔酶ⅠNAD測(cè)試劑盒微量法

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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai Fusheng Industrial Co., Ltd.,China)先后與天津中醫(yī)學(xué)院、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院、上海交通大學(xué)、華東師范大學(xué)、第二軍醫(yī)大學(xué)、南京大學(xué),暨南大學(xué),南京工業(yè)大學(xué),曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機(jī)研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關(guān)系。本公司可為您提供科研ELISA試劑盒,種屬標(biāo)本齊全,有專(zhuān)門(mén)針對(duì)人血清、血漿、全血、分泌物、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液等標(biāo)本的試劑盒;另有針對(duì)各種動(dòng)物(鼠、兔、牛、馬、雞、豬、狗、山羊、猴、魚(yú))的科研試劑。


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貨號(hào)FS-01S63210
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H輔酶ⅠNAD測(cè)試劑盒微量法 產(chǎn)品詳情

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產(chǎn)品名稱(chēng):H輔酶ⅠNAD測(cè)試劑盒微量法

規(guī)格:100管/48樣

檢測(cè)方法:微量法

貨號(hào):FS-01S63210


商品介紹:

測(cè)定意義

輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(huán)(TCA)的主要?dú)涫荏w,生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成ATP的同時(shí),形成大量的ROS,同時(shí)NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過(guò)這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評(píng)價(jià)糖酵解和TCA循環(huán)的強(qiáng)弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說(shuō)明細(xì)胞呼吸耗氧量較高,處于過(guò)氧化狀態(tài)。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外,NAD+降解產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、代謝和基因表達(dá)等具有重要的調(diào)控作用。

測(cè)定原理

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH,NADH通過(guò)PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(lán)(MTT)為甲瓚,在570nm下檢測(cè)吸光值;而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH,進(jìn)一步采用MTT還原法檢測(cè)。

需自備的儀器和用品

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;

試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;

試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
QQ截圖20220307153604.png

粗酶液提?。?/span>

1、細(xì)胞或組織樣品的制備:

培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1ml提取液),超聲波破碎細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1ml提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)允瓜♂尯蟮臉悠贩显噭┖械臋z測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。

Anti-2,4-D2,4-二氯苯氧乙酸 /除草劑/激素型除草劑抗體 0.1ml

Anti-5-HT5-羥色胺抗體 0.1ml

Anti-5-HTR1A5-羥色胺受體1A抗體 0.1ml

Anti-5-HT1B5-羥色胺受體1B抗體 0.1ml

Anti-5-HTR2A5-羥色胺受體2A抗體 0.1ml

Anti-5-LOX5-脂氧合酶抗體 0.1ml

anti-8-OHdG8-羥基脫氧鳥(niǎo)苷 0.2ml

Anti-AACT-α1α-1抗胰抗體 0.1ml

Anti-AATα-1抗抗體 0.2ml

Anti-AATF拮抗凋亡轉(zhuǎn)錄因子抗體 0.2ml

Anti-ABCB6ABCB6抗體 0.2ml

Anti-ABCG1三磷酸腺苷結(jié)合盒G1抗體 0.2ml

Anti-ABCG2三磷酸腺苷結(jié)合盒G2抗體 0.2ml

Anti-ABL1ABL1抗體 0.1ml

Anti-ABL2ABL2抗體 0.2ml

Anti-ACE1血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抗體 0.1ml

Anti-ACEI血管緊張素1轉(zhuǎn)換酶抑制劑抗體 0.1ml

Anti-Acinus腺泡Acinus抗體 0.1ml

Anti-Ack1Ack1抗體 0.2ml

Anti-β-Actinβ-肌動(dòng)蛋白抗體 0.1ml

Anti-ACTH促腎上腺皮質(zhì)激素抗體 0.1ml

Anti-Actin α /α-SMA   肌動(dòng)蛋白α抗體 0.1ml

Anti-AD7C-NTP/NTP/AF   神經(jīng)絲蛋白抗體 0.1ml

Anti-ADAM-TS1/METH1  整合素樣金屬蛋白酶與型 0.2ml

Anti-ADAM-TS7   整合素樣金屬蛋白酶與l

Anti-Adducin protein內(nèi)收蛋白抗體 0.2ml

Anti-ADFP/ADRP/adipophilin  脂肪組織分化相關(guān)蛋白抗體 0.2ml

Anti-Adipo R1  脂聯(lián)素受體-1抗體 0.1ml

Anti-Adipo R2 脂聯(lián)素受體-2抗體 0.1ml

接觸蛋白1(CNTN1)檢測(cè)試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)CLIA Kit for Contactin 1 (CNTN1)96TMus musculus (Mouse)

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