磁珠法土壤和糞便基因組

產(chǎn)品簡介 

   本試劑盒采用的脫腐緩沖液系統(tǒng)，可以將土壤樣本中的腐植酸盡可能的去除，并且 配有的研磨珠可有效破碎土壤樣本中的各種復(fù)雜成分，保證從土壤中提取基因組DNA的完整 性，同時(shí)本試劑盒也適用于糞便樣本的基因組DNA提取。 

使用本試劑盒回收的DNA雜質(zhì)少，完整性好，可直接用于PCR、酶切等分子生物學(xué)下游 實(shí)驗(yàn)。 

產(chǎn)品特點(diǎn)

 適用范圍廣：適用于花壇土、花盆土、農(nóng)田土、山林土、淤泥、紅土、黑土、粉塵等多類土 壤環(huán)境樣本的提取，同樣適用于糞便樣本的提取。 操作便捷：能夠集中在相對較短時(shí)間內(nèi)完成實(shí)驗(yàn)操作。 

高純度：與磁珠法純化相結(jié)合，提取的DNA純度高，可直接用于下游實(shí)驗(yàn)。

 注意事項(xiàng) 請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)。

 1．新采取的樣本會得到更高的得率，不同樣本在采樣前應(yīng)先查閱相應(yīng)的保存條件。

 2. 在需要吸取上清液的步驟中應(yīng)避免吸到沉淀，否則會影響產(chǎn)物純度。 

3. 緩沖液GFA、去蛋白液RD和漂洗液PWD使用前請參照瓶上標(biāo)簽加入相應(yīng)的醇。 

4. 過量的DNA可能抑制下游PCR反應(yīng)，遇到這種情況建議將DNA模板進(jìn)行稀釋后使用。 

5. 使用前檢查緩沖液SC是否有沉淀，若有沉淀，請?jiān)?7℃加熱至溶解后使用。

 6. 糞便樣本中可能有RNA殘留，如果需要去除RNA，需自備RNase A溶液（目錄號： RT405-02）。

操作步驟 

使用前請先在緩沖液GFA中加入異丙醇；在去蛋白液RD和漂洗液PWD中加入無水乙醇，加 入體積請參照瓶上標(biāo)簽。

 1. 樣本處理

 1）土壤樣本處理： 在2 ml離心管中加入樣本0.25-0.5 g，加入500 µl緩沖液SA、100 µl緩沖液SC和0.25 g研 磨珠，渦旋振蕩15 min至樣本混勻或使用TGrinder H24組織研磨均質(zhì)儀（OSE-TH-01） 混勻（6M/S的速度振蕩30s，間隔30s，共2個(gè)循環(huán)）。12,000 rpm (~13,400×g ) 離心1 min，轉(zhuǎn)移上清液（約500 µl）至新的2 ml離心管。

 注意：針對一些得率低或需提取真菌基因組的樣本，建議渦旋震蕩混勻或組織勻質(zhì)儀震 蕩混勻后70℃加熱裂解15 min以提高裂解效率。 2）糞便樣本處理： 在2 ml離心管中加入樣本0.25-0.5 g，如果是液態(tài)樣本則轉(zhuǎn)移200 µl至離心管中，加入500 µl緩沖液SA、100 µl緩沖液SC和0.25 g研磨珠，（糞便樣本中可能有RNA殘留，如果需 要去除RNA，建議再加入10 µl RNase A（TIANGEN，RT405-02， 自備））渦旋震蕩混 勻或組織勻質(zhì)儀震蕩混勻后70℃加熱裂解15min提高裂解效率。12,000 rpm (~13,400×g ) 離心1 min，轉(zhuǎn)移上清液（約500 µl）至新的2 ml離心管。

 注意：對于較難破壁的革蘭氏陽性菌，可將溫度提高至95℃以促進(jìn)裂解。

 2. 加入200 µl緩沖液SH混勻，渦旋5 sec，4℃放置10 min。 

3. 12,000 rpm (~13,400×g ) 離心3 min，轉(zhuǎn)移上清液至新的2 ml離心管，加入500 µl緩沖液 GFA（使用前請先檢查是否已加入異丙醇），顛倒混勻。 

注意：轉(zhuǎn)移上清時(shí)不要移走沉淀，否則可能降低DNA純度。

 4. 加入10 µl磁珠懸浮液G，振蕩混勻5 min。

 注意：為了確保磁珠重懸，請?jiān)谑褂们罢袷幓靹?nbsp;

5. 將離心管放置于磁力架上靜置30 sec，磁珠吸附后，小心吸去液體。