細(xì)胞名稱： 人單核細(xì)胞白血*（STR鑒定正確） thp1細(xì)胞

細(xì)胞別稱： THP1; THP 1; THPI; THP-1(ATCC); O-THP-1; 

Tohoku Hospital Pediatrics-1

貨號：TCH-C361

規(guī)格：1×10?cells/T25 培養(yǎng)瓶

價(jià)格：1500元 (干冰運(yùn)輸需另加200元干冰費(fèi))

種屬來源：人

組織來源：外周血

特征：急性單核細(xì)胞白血*

細(xì)胞形態(tài)：單核細(xì)胞樣

生長特性：懸浮生長

培養(yǎng)體系：RPMI-1640+10%FBS+0.05 mM β-mercaptoethanol+1%P/S

配套培養(yǎng)基貨號：TCH-G361

傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次

傳代周期：24-48 h

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃

thp1細(xì)胞凍存條件：60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲存

質(zhì)量檢測：細(xì)菌、真菌、支原體檢測均為陰性

  thp1細(xì)胞從一名1歲的急性單核細(xì)胞性白血*的男孩的外周血中分離建立。該細(xì)胞可以吞噬乳膠顆粒和激活的紅細(xì)胞，細(xì)胞膜和胞漿內(nèi)均沒有免疫球蛋白，表達(dá)C3R和FcR；可受弗波酯TPA誘導(dǎo)向單核系方向分化；可作為轉(zhuǎn)染宿主。

  thp1細(xì)胞培養(yǎng)要點(diǎn) 

人單核細(xì)胞白血*細(xì)胞（THP-1）培養(yǎng)注意要點(diǎn)

 1.  THP-1細(xì)胞為懸浮生長，部分細(xì)胞聚集成團(tuán)，部分細(xì)胞分散；

 2. THP-1細(xì)胞更喜歡酸性環(huán)境，在偏酸性環(huán)境中，THP-1生長更快，所以 當(dāng)培養(yǎng)基稍微變黃（呈橘紅色）時(shí)，是適合細(xì)胞生長的，此時(shí)補(bǔ)液或半換液即可。

 3. THP-1細(xì)胞有密度依賴性，THP-1細(xì)胞密度低時(shí)，生長較慢，培養(yǎng)密度 維持在4 ~8×10 5 /mL為宜；超過2.0 ×10 6 /mL則需要傳代。

 4. THP-1細(xì)胞對機(jī)械力較敏感。正常培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)盡量避免吹打力道過大。 暴力吹打會使細(xì)胞分化和死細(xì)胞增加。 

 5. 血清質(zhì)量差異可能引起細(xì)胞狀態(tài)變化，建議選用高質(zhì)量的胎牛血清。 

人單核細(xì)胞白血*細(xì)胞（THP-1）換液方法：

 1. 補(bǔ)液法：培養(yǎng)基變黃時(shí)可補(bǔ)加適量（1~2mL）新鮮培養(yǎng)基，補(bǔ)加1-2次 之后，用離心的方式全部換液，離心1200rpm （約250g）3分鐘。   2.半換液法：以T25瓶子為例，瓶子里裝有5mL培養(yǎng)基。豎起瓶子靜置一 段時(shí)間，待細(xì)胞沉底，小心吸出2.5mL的培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)移到離心管，離心1200rpm（約 250g）3分鐘，檢查有沒有沉淀，以免損失細(xì)胞；原瓶補(bǔ)充2.5mL新鮮培養(yǎng)基， 離心管里若有細(xì)胞，則用新鮮培養(yǎng)基重懸后放回原瓶。 

3. 如果換液后第二天培養(yǎng)基就變得很黃，同時(shí)鏡下檢查未污染，說明細(xì)胞密度大，應(yīng)該傳代。

人單核細(xì)胞白血*細(xì)胞（THP-1）傳代方法：

 1. 搖晃培養(yǎng)瓶，把細(xì)胞搖勻，均分到兩個(gè)瓶子里，每瓶再補(bǔ)充等量培養(yǎng)基。 

 2. 離心法：離心后計(jì)數(shù)，按照40-50萬細(xì)胞/mL的密度接種到T25瓶里，瓶中培養(yǎng)基量以5mL為宜。不方便計(jì)數(shù)時(shí)，按1:2比例傳代。 

 3. 死細(xì)胞或細(xì)胞碎片較多的情況下，建議用離心法傳代，離心轉(zhuǎn)速可適當(dāng) 降低（推薦800~1000rpm或160~200g）。 

 人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞（THP-1）凍存方法

1. 由于THP-1是懸浮細(xì)胞，更易受到凍存影響，建議加大凍存密度，大約 200萬-300萬/mL為宜，以提高復(fù)蘇存活率。 
2. THP-1細(xì)胞對凍存溫度比較敏感，建議凍存后立即轉(zhuǎn)入-80℃冰箱，長 期保存應(yīng)放在液氮罐中。

 THP-1細(xì)胞復(fù)蘇后通常需要3-5天恢復(fù)狀態(tài)，建議復(fù)蘇后48小時(shí)內(nèi)不要 進(jìn)行操作。

 人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞（THP-1）常見問題及解決方法：

1.培養(yǎng)基里一定要加β-mercaptoethanol嗎？

 β-mercaptoethanol 是一種常用的培養(yǎng)補(bǔ)充劑，有抗氧化的作用，可減少氧化應(yīng)激對 THP-1細(xì)胞的影響。當(dāng)細(xì)胞密度過大但需要維持時(shí)，可適當(dāng)增加β-mercaptoethanol 的比 例（不超過標(biāo)準(zhǔn)量的1.5倍）。

2.懸浮細(xì)胞在鏡下觀察時(shí)，難以聚焦或估算密度怎么辦？ 

  懸浮細(xì)胞會隨著液體流動，不容易聚焦，靜置5-10分鐘使細(xì)胞沉底，之后再輕 輕放上顯微鏡觀察，將有助于聚焦和估算細(xì)胞密度。 

3.THP-1細(xì)胞在培養(yǎng)過程中細(xì)胞發(fā)生聚團(tuán)怎么辦？ 

 少量細(xì)胞聚團(tuán)，呈葡萄串狀，屬于正?，F(xiàn)象，特別是細(xì)胞密度較低時(shí)，易出現(xiàn)這 種情況。更換血清品牌或增大血清比例（不超過20%）有助于解決聚團(tuán)問題。不 建議將聚團(tuán)的細(xì)胞吹散，等待密度高時(shí)，會自己分散開。 

4. THP-1細(xì)胞在培養(yǎng)過程中細(xì)胞發(fā)生貼壁怎么辦？ 

  少量細(xì)胞貼壁屬于正常情況，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至新瓶中即可。當(dāng)貼壁細(xì)胞的比例 高于20%，說明細(xì)胞生長環(huán)境有異常，需排查培養(yǎng)箱設(shè)置、培養(yǎng)基成分，以及細(xì)胞培養(yǎng)瓶、三角搖瓶是否異常。

參考文獻(xiàn)：

"Tsuchiya S, et al. Induction of maturation in cultured human monocytic leukemia cells by a phorbol diester. Cancer Res. 42: 1530-1536, 1982. PubMed: 6949641

Skubitz KM, et al. Human granulocyte surface molecules identified by murine monoclonal antibodies. J. Immunol. 131: 1882-1888, 1983. PubMed: 6619543

Cuthbert JA, Lipsky PE. Regulation of proliferation and Ras localization in transformed cells by products of mevalonate metabolism. Cancer Res. 57: 3498-3504, 1997. PubMed: 9270019

Huang S, et al. Adenovirus interaction with distinct integrins mediates separate events in cell entry and gene delivery to hematopoietic cells. J. Virol. 70: 4502-4508, 1996. PubMed: 8676475

Clark RA, et al. Tenascin supports lymphocyte rolling. J. Cell Biol. 137: 755-765, 1997. PubMed: 9151679

Hambleton J, et al. Activation of c-Jun N-terminal kinase in bacterial lipopolysaccharide-stimulated macrophages. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 2774-2778, 1996. PubMed: 8610116

Hsu HY, et al. Inhibition of macrophage scavenger receptor activity by tumor necrosis factor-alpha is transcriptionally and post-transcriptionally regulated. J. Biol. Chem. 271: 7767-7773, 1996. PubMed: 8631819

Lucas M, Mazzone T. Cell surface proteoglycans modulate net synthesis and secretion of macrophage apolipoprotein E. J. Biol. Chem. 271: 13454-13460, 1996. PubMed: 8662812

Sando GN, et al. Induction of ceramide glucosyltransferase activity in cultured human keratinocytes. J. Biol. Chem. 271: 22044-22051, 1996. PubMed: 8703011

Ollivier V, et al. Elevated cyclic AMP inhibits NF-kappaB-mediated transcription in human monocytic cells and endothelial cells. J. Biol. Chem. 271: 20828-20835, 1996. PubMed: 8702838

Tsuchiya S, et al. Establishment and characterization of a human acute monocytic leukemia cell line (THP-1). Int. J. Cancer 26: 171-176, 1980. PubMed: 6970727"