3T3誘導(dǎo)分化試劑盒

3T3誘導(dǎo)分化試劑盒 產(chǎn)品性能穩(wěn)定，可提高小鼠細(xì)胞成骨誘導(dǎo)效率；

 3T3誘導(dǎo)分化試劑盒使用說(shuō)明 

1. 成脂誘導(dǎo)分化操作

 1.1 接種干細(xì)胞 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞， 按 照 2.0×10e4 cells/cm2 的細(xì)胞密度接種至培養(yǎng)器皿，于 37℃， 5% CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)至匯合度 90~99%，棄掉 上清，加入成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)液。 

NOTE：如細(xì)胞貼壁性較差，建議使用 0.1%明膠對(duì)培養(yǎng)底 面進(jìn)行包被。

1.2 細(xì)胞分化誘導(dǎo) 于 37℃，5% CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)約 3 天，更 換為成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基維持液，培養(yǎng) 1 天后， 再更換為成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)液，繼續(xù)培養(yǎng) 3 天。 按照以上換液頻率誘導(dǎo) 14~21 天，并注意觀 察細(xì)胞形態(tài)變化。根據(jù)細(xì)胞誘導(dǎo)形成的脂滴數(shù)量 和大小，決定終止細(xì)胞誘導(dǎo)的時(shí)間，并進(jìn)行染色 鑒定。

 2. 染色鑒定

 2.1 細(xì)胞固定 吸去培養(yǎng)基使用適量 1×PBS 清洗一次，棄去 后取適量 4%中性覆蓋培養(yǎng)器皿底面，室 溫固定 30~60 min，棄去固定液再使用 1×PBS 清 洗兩次。 

2.2 油紅 O 染色 取生理鹽水或1×PBS與油紅O原液配制油紅 O工作液（油紅O原液: 生理鹽水=3:2），現(xiàn)用現(xiàn) 配。配制后可對(duì)油紅O工作液進(jìn)行離心，以沉淀 染色液中的過(guò)飽和析出物。向清洗干凈的誘導(dǎo)孔 內(nèi)加入適量油紅O工作液，靜置染色30min。吸走 油紅O工作液，用1×PBS清洗兩次，并加入適量1 ×PBS避免細(xì)胞干燥。

 2.3 誘導(dǎo)評(píng)估

 顯微鏡下觀察成脂染色效果，并進(jìn)行圖像采 集和誘導(dǎo)評(píng)估。誘導(dǎo)成功時(shí)，脂滴與油紅 O 染料 結(jié)合后呈現(xiàn)紅色或橘紅色。 NOTE: 干細(xì)胞的成脂分化水平因細(xì)胞類型、細(xì)胞供體來(lái) 源，培養(yǎng)條件、細(xì)胞代次、細(xì)胞狀態(tài)和分化時(shí)間等因素而異。