本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)酶標(biāo)免疫法定量測(cè)定尿、肌肉，肝臟及飼料中的克倫特羅及其他β。試劑盒中包括了96個(gè)試驗(yàn)孔包括標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)及所有檢測(cè)用的試劑。如果進(jìn)行定量分析，必須有微孔板酶標(biāo)儀。

克侖特羅（clenbuterol，CLE）是一種腎上腺受體激動(dòng)劑即神經(jīng)，在臨床上用于治療支氣管哮喘、慢性支氣管炎和肺氣腫等疾病，因此藥可以提高瘦肉率，減少脂肪沉積和促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，被一些畜牧養(yǎng)殖企業(yè)作為養(yǎng)殖促進(jìn)劑非法使用。其殘留量可導(dǎo)致人體肌肉震顫、心悸、神經(jīng)過(guò)敏、頭痛、目眩、、嘔吐、發(fā)燒、戰(zhàn)栗等癥狀，對(duì)消費(fèi)者的健康極有危害?，F(xiàn)已被明令禁止用于養(yǎng)殖業(yè)。HPLC或GC-MS一直用作檢測(cè)β的方法，但是其前處理步驟費(fèi)用昂貴。酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒則可經(jīng)濟(jì)、快速地檢測(cè)尿，肌肉，肝臟及飼料中的CLE。

測(cè)定原理：

測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)。微孔板包被有針對(duì)CLE的兔抗體。經(jīng)過(guò)洗滌步驟后，加入CLE酶標(biāo)記物，標(biāo)準(zhǔn)或樣品溶液。CLE與CLE-酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)抗體，沒有連接的CLE-酶標(biāo)記物在洗滌步驟中被除去。將酶反應(yīng)底物（過(guò)氧化尿素）和顯色劑（四甲基聯(lián)*）加入到孔中并且孵育。結(jié)合的酶標(biāo)記物將無(wú)色的顯色劑轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的產(chǎn)物。加入反應(yīng)停止液后使顏色由藍(lán)轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。在450nm處測(cè)量，吸收光強(qiáng)度與樣品中的CLE濃度成反比。

提供的試劑（2-8℃保存）切勿冷凍

每一個(gè)盒中的試劑足夠進(jìn)行96個(gè)測(cè)量（包括標(biāo)準(zhǔn)分析孔），盒中的材料如下：

1×96孔板（12條×8孔）包被有兔IgG抗體

6×標(biāo)準(zhǔn)液，       (2ml)為分別含0, 0.1, 0.3, 0.9, 2.7, 8.1ppb 的CLE水溶液

1×CLE過(guò)氧化物酶標(biāo)記物濃縮溶液

1×酶反應(yīng)底物 （6ml）；含有過(guò)氧化尿素

1×顯色劑         （6ml）;四甲基聯(lián)*

1×反應(yīng)停止液 （7ml）；1M 硫酸

1×PBS        (10ml), 用于稀釋CLE-過(guò)氧化物酶標(biāo)記物濃縮溶液

1×PBST濃縮液(40ml)，加800ml蒸餾水稀釋，洗板用

樣品處理：

樣品處理方法1：

組織、肉樣（純精肉）、內(nèi)臟樣品的處理方法:

１．稱2克勻漿過(guò)的樣品加入2 mL溶液１(無(wú)色無(wú)味)，攪拌或震蕩樣品，使之混合均勻。

2. 加入6 ml溶液2(淡黃色,具刺激性氣味)，推薦用干凈的衛(wèi)生筷或竹簽攪拌樣品5分鐘；或振蕩15分鐘，使其均勻分布于溶液中。

3．3000g離心10分鐘。

4.  取3ml上清液于干凈平皿中,60℃恒溫箱蒸干(30分鐘左右)；也可在試管中直接水浴加熱蒸干。

5．殘留物用1ml 溶液2 (無(wú)色無(wú)味) 沖洗溶解。

6．3000g離心10分鐘。

7．取清亮中間部分50ul直接加樣, ELISA進(jìn)行分析。

注：如果不慎將溶液弄到皮膚上，請(qǐng)立即用７５％的科研酒精棉花擦拭，并用清水沖洗。切勿飲用及濺入眼睛。

樣品處理方法2 （更快速）：

1、稱2克勻漿過(guò)的樣品加入2 mL溶液１(無(wú)色無(wú)味)，攪拌或震蕩樣品，使之混合均勻。

2、加入4mL溶液2 (淡黃色,具刺激性氣味)，強(qiáng)烈振蕩，肉樣約2分鐘，組織約6分鐘。

3、3000g離心5分鐘。

4、取1 ml上清液于干凈平皿中，70℃~80℃恒溫箱蒸干(約需5分鐘左右)?；蛴秒姶碉L(fēng)，只需3分鐘。

5、殘留物用0.5 ml 溶液3 (無(wú)色無(wú)味) 沖洗，將底部白色殘留物全部洗入溶液。

6、取洗脫液50ul作檢測(cè)用。