細胞簡介：

人胰腺星狀分離自胰腺組織；胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有碳suan氫鈉、yi蛋白酶原、脂肪酶、淀粉mei等。胰液通過胰腺管排入十二指腸，有消化蛋白質(zhì)、脂肪和糖的作用。內(nèi)分泌腺由大小不同的細胞團──胰島所組成，胰島主要由4種細胞組成：α細胞、β細胞、γ細胞及PP細胞。α細胞分泌胰高血糖素，升高血糖；β細胞分泌胰島素，降低血糖；γ細胞分泌生長抑su，以旁分泌的方式抑制α、β細胞的分泌；PP細胞分泌胰多肽，抑制胃腸運動、胰液分泌和膽囊收縮。纖維化是慢性胰腺炎的典型病理特征，活化的胰腺星狀細胞（PSC）是胰腺纖維化的主要效應(yīng)細胞，PSC分離和成功培養(yǎng)是體外研究胰腺纖維化的重要前提。未活性化的PSC胞漿中富含維A脂滴，并表達Desmin蛋白，活化后的PSC則表達α-平滑肌肌動蛋白（alpha-SMA）。PSC具有靜息態(tài)與激活態(tài)兩種，并分別具有特異的標志物。靜息狀態(tài)PSC胞質(zhì)內(nèi)富含的脂滴可以被油紅O染成紅色，陽性表達Desmin。激活狀態(tài)PSC陽性表達alpha-SMA。油紅O染色發(fā)現(xiàn)，原代分離的細胞培養(yǎng)6d，胞漿中仍可見明顯的脂滴，傳代后，橙紅色的脂滴顆粒顯著減少甚至消失。免疫細胞化學(xué)染色顯示，細胞接種24h仍然表達Desmin，48h后Desmin基本不再表達。培養(yǎng)48h后絕大多數(shù)細胞開始表達alpha-SMA，隨著培養(yǎng)時間的增長和傳代次數(shù)的增加，細胞表達alpha-SMA，而不再表達Desmin，說明細胞活化。提示PSC接種24h后即啟動了激活過程，至培養(yǎng)第6d大多數(shù)細胞激活，傳代后細胞處于高度激活狀態(tài)。原代胰腺星狀細胞可作為慢性胰腺炎新藥的細胞篩選模型，目前研究發(fā)現(xiàn)：胰腺受損時，在各種刺激因子作用下使胰腺星狀細胞活化，導(dǎo)致細胞形態(tài)、功能發(fā)生變化，促使基質(zhì)增生、膠原蛋白的大量生成及不規(guī)則沉積。
方法簡介：

公司實驗室分離的人胰腺星狀采用膠原酶制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的人胰腺星狀經(jīng)α-SMA、Desmin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1) 將5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中，移入生物安全柜，

2) 從胸部解剖乳鼠，取出雙肺置于預(yù)冷的PBS中，盡可能的除去結(jié)締組織等，

3) 取肺邊緣部分，剪碎，將組織塊移入T25培養(yǎng)瓶中，倒置于細胞培養(yǎng)箱中，

4) 2h后，培養(yǎng)瓶中注入2 mL內(nèi)皮培養(yǎng)基，小心將培養(yǎng)瓶正置于培養(yǎng)箱，確保組織塊不會飄起來，

5) 每3d換液2mL，待細胞從組織塊中爬出來后，隔2d換液，待細胞融合達到60-70%左右時，去除組織塊，將肺微血管內(nèi)皮細胞重新鋪瓶。

1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出T-25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置4-6小時或過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.125%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細胞貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.125%消化液約2ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后輕輕吹打細胞使之脫落，再加入培養(yǎng)液終止消化，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；

3）用適當量的凍存液（基礎(chǔ)培養(yǎng)基：FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。

4、細胞復(fù)蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具）， 快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至15ml無菌離心管中，滴加入培養(yǎng)液5ml混勻細胞，然后將細胞懸液轉(zhuǎn)移至適當面積大小的培養(yǎng)皿中；

3）放置于37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。