【產(chǎn)品名稱】

副溶血弧菌核酸快速檢測試劑盒

??【產(chǎn)品簡介】

??本試劑盒基于環(huán)介導(dǎo)的恒溫擴增技術(shù)(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)，用于食品中副溶血弧菌的快速檢測，可借助顯色指示劑直接判讀結(jié)果。

??【檢測原理】

??利用兩對特殊引物和具有鏈置換活性的Bst DNA聚合酶，使模板兩端引物結(jié)合處循環(huán)出現(xiàn)環(huán)狀單鏈結(jié)構(gòu)，引物順利與模板結(jié)合并進行鏈置換擴增反應(yīng)，實現(xiàn)在恒溫條件下(60-65℃)進行連續(xù)快速擴增。反應(yīng)加入顯色指示劑，陰陽性結(jié)果顯色差異顯著，可直接通過顏色變化判讀結(jié)果。

??【產(chǎn)品特點】

??1. 快速簡便：將酶、引物等反應(yīng)組分混勻后進行干粉化處理，增加試劑穩(wěn)定性，使用時減少溶液配制步驟，更為便捷，整個檢測反應(yīng)可在1 h內(nèi)完成;

??2. 特異性高：利用靶基因序列上的多個獨立區(qū)域設(shè)計多條引物，保證擴增反應(yīng)的高度特異性;

??3. 靈敏度高：檢驗限達到4 CFU/Test;

??4. 判讀簡單：反應(yīng)前加入顯色指示劑，反應(yīng)后通過肉眼觀察反應(yīng)液顏色變化或者經(jīng)熒光監(jiān)測儀器跟蹤熒光圖譜的變化判讀結(jié)果，直觀方便，且可有效避免反應(yīng)后開蓋造成的氣溶膠污染。

【產(chǎn)品組分】

　　組分名稱
規(guī)格×數(shù)量

檢測試劑（凍干）     3排× 8管

復(fù)溶液　　　　 　　 650 μL × 1管

陽性對照（凍干）     1管

陰性對照（凍干）     1管

裂解液　　　 　 　   1 mL × 1管

顯色指示劑　　　　   80 μL×1管

超純水　　　 　 　   1 mL×1管

2~8℃條件下儲存，有效期為12個月

??【適用儀器】

??1. PCR儀器或金屬浴恒溫器，如果檢測樣品為DNA樣品，水浴鍋即可。

??2. 高速離心機，樣品的前處理需要用高速離心機做分離。

??【樣品富集】

??1. 樣品前處理：取25 g待檢樣品置于225 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨水中，前增菌10-12 h，對增菌液中的菌體富集用于LAMP快速檢測。

??2. 適用樣品類型：增菌液或者可疑菌落樣品。

??3. 待測樣品存放：粗提的待檢DNA樣品保存于-4~0℃，不應(yīng)該超過24 h;利用試劑盒提取的DNA樣品可在-20℃長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

??【使用指南】

??1.樣品前處理

??A. 樣品增菌液模板DNA的制備：

??a) 吸增菌液1 mL到1.5 mL規(guī)格的無菌離心管中，6000 r/min離心5 min，棄上清;

??b) 加入30 μL裂解液，充分懸浮菌體，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱10 min。

??c) 12000 r/min離心15 min，上清即為粗提的DNA，可轉(zhuǎn)移至0.2 mL無菌離心管中，在-20℃下可長期保存。

??B. 可疑菌落模板DNA的制備：

??挑取可疑菌落，懸浮到含30 μL裂解液的無菌離心管中，后按照上述步驟b)、c)操作。

??2.陰、陽性對照和干粉試劑復(fù)溶

??A. 陰、陽性對照復(fù)溶

??使用時，加入80 μL超純水至陽性對照和陰性對照凍干粉中，待溶解后混勻，-20℃存儲待用。

??B. 干粉試劑復(fù)溶

??取出凍干粉試劑，按照需求剪取n個檢測試劑管(n=待檢測樣品數(shù)+1管陽性對照+1管陰性對照)，每管加入20 μL復(fù)溶液，溶解后待用。

??3.擴增反應(yīng)

??A. 打開能夠提供恒溫條件的儀器，設(shè)置到64℃待用;

??B. 向上述已加入復(fù)溶液的n個反應(yīng)管中各加入顯色指示劑2.5 μL;

??C. 向上述已加入復(fù)溶液的n個反應(yīng)管中分別加入待測樣品核酸、陰性對照、陽性對照各2.5 μL，蓋緊蓋子;

??D. 將所有的反應(yīng)管置于恒溫儀器中，恒溫64℃反應(yīng)50 min。

??4.結(jié)果判讀

??反應(yīng)結(jié)束后，建議在自然光線充足的環(huán)境條件下，將樣品置于白色背景下觀察結(jié)果，陰性對照檢測試劑管呈淡橙色，陽性對照檢測試劑管呈熒光綠，待測樣品反應(yīng)管以此作為對照進行判讀，若陰陽對照反應(yīng)管任一結(jié)果與上述情況不符，則本次檢測結(jié)果無效，應(yīng)重新檢測或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。