【產品名稱】

單核增生李斯特氏菌核酸快速檢測試劑盒

【產品簡介】

?本試劑盒基于環(huán)介導的恒溫擴增技術(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)，用于食品中單核增生李斯特氏菌的快速檢測，可借助顯色指示劑直接判讀結果。

【檢測原理】

??利用兩對特殊引物和具有鏈置換活性的Bst DNA聚合酶，使模板兩端引物結合處循環(huán)出現(xiàn)環(huán)狀單鏈結構，引物順利與模板結合并進行鏈置換擴增反應，實現(xiàn)在恒溫條件下(60-65℃)進行連續(xù)快速擴增。反應加入顯色指示劑，陰陽性結果顯色差異顯著，可直接通過顏色變化判讀結果。

【產品特點】

??1. 快速簡便：將酶、引物等反應組分混勻后進行干粉化處理，增加試劑穩(wěn)定性，使用時減少溶液配制步驟，更為便捷，整個檢測反應可在1 h內完成;

??2. 特異性高：利用靶基因序列上的多個獨立區(qū)域設計多條引物，保證擴增反應的高度特異性;

??3. 靈敏度高：檢驗限達到8 CFU/Test;

??4. 判讀簡單：反應前加入顯色指示劑，反應后通過肉眼觀察反應液顏色變化或者經熒光監(jiān)測儀器跟蹤熒光圖譜的變化判讀結果，直觀方便，且可有效避免反應后開蓋造成的氣溶膠污染。

【產品組分】

組分名稱　　　　 　 　規(guī)格×數(shù)量

檢測試劑（凍干）        3排× 8管

復溶液　　　 　 　 　 650 μL × 1管

陽性對照（凍干）       1管

陰性對照（凍干）       1管

裂解液　　　 　 　 　1 mL × 1管

顯色指示劑　　　　　80 μL×1管

超純水　　　 　 　 　1 mL×1管

說明書　　　 　 　 　1份

2~8℃條件下儲存，有效期為12個月

【適用儀器】

??1. PCR儀器或金屬浴恒溫器，如果檢測樣品為DNA樣品，水浴鍋即可。

??2. 高速離心機，樣品的前處理需要用高速離心機做分離。

【樣品富集】

??1. 樣品前處理：取25 g待檢樣品置于225 mL李氏增菌肉湯(LB1)中，前增菌10-12 h，對增菌液中的菌體富集用于LAMP快速檢測。

??2. 適用樣品類型：增菌液或者可疑菌落樣品。

??3. 待測樣品存放：粗提的待檢DNA樣品保存于-4~0℃，不應該超過24 h;利用試劑盒提取的DNA樣品可在-20℃長期保存，但應避免反復凍融。

【使用指南】

??1. 樣品前處理

??A. 樣品增菌液模板DNA的制備：

??a) 吸增菌液1 mL到1.5 mL規(guī)格的無菌離心管中，6000 r/min離心5 min，棄上清;

??b) 加入30 μL裂解液，充分懸浮菌體，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱10 min。

??c) 12000 r/min離心15 min，上清即為粗提的DNA，可轉移至0.2 mL無菌離心管中，在-20℃下可長期保存。

??B. 可疑菌落模板DNA的制備：

??挑取可疑菌落，懸浮到含30 μL裂解液的無菌離心管中，后按照上述步驟b)、c)操作。

??2. 陰、陽性對照和干粉試劑復溶

??A. 陰、陽性對照復溶

??使用時，加入80 μL超純水至陽性對照和陰性對照凍干粉中，待溶解后混勻，-20℃存儲待用。

??B. 干粉試劑復溶

??取出凍干粉試劑，按照需求剪取n個檢測試劑管(n=待檢測樣品數(shù)+1管陽性對照+1管陰性對照)，每管加入20 μL復溶液，溶解后待用。

??3. 擴增反應

??A. 打開能夠提供恒溫條件的儀器，設置到63℃待用;

??B. 向上述已加入復溶液的n個反應管中各加入顯色指示劑2.5 μL;

??C. 向上述已加入復溶液的n個反應管中分別加入待測樣品核酸、陰性對照、陽性對照各2.5 μL，蓋緊蓋子;

??D. 將所有的反應管置于恒溫儀器中，恒溫63℃反應50 min。

??4. 結果判讀

??反應結束后，建議在自然光線充足的環(huán)境條件下，將樣品置于白色背景下觀察結果，陰性對照檢測試劑管呈淡橙色，陽性對照檢測試劑管呈熒光綠，待測樣品反應管以此作為對照進行判讀，若陰陽對照反應管任一結果與上述情況不符，則本次檢測結果無效，應重新檢測或與產品技術支持聯(lián)系。