LAD2 人肥大細胞說明書  

一、細胞基本信息

細胞全稱：LAD2 人肥大細胞系

細胞來源：人急性髓系白血病患者外周血分離建立的永生化肥大細胞系

細胞特性：懸浮或半貼壁生長，保留成熟肥大細胞核心表型，表達FcεRI高親和力IgE受體、受IgE交聯(lián)刺激后可穩(wěn)定釋放組胺、β-己糖胺酶等炎癥介質(zhì)，是目前過敏相關(guān)研究常用的人源肥大細胞模型。

推薦應用場景：IgE介導的過敏反應機制研究、肥大細胞活化抑制劑藥物篩選、炎癥因子釋放通路驗證。

二、培養(yǎng)基配方

該細胞對營養(yǎng)要求較高，常規(guī)RPMI 1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基需針對性補充關(guān)鍵組分：

基礎(chǔ)培養(yǎng)基：RPMI 1640 含L

血清添加：10% 熱滅活胎牛血清，提前篩選適配的穩(wěn)定血清批次

核心添加劑：重組人IL-3 10 ng/mL、重組人SCF（干細胞因子）100 ng/mL

可選添加：雙抗1%，避免支原體污染

三、標準傳代操作流程

培養(yǎng)條件：37℃、5% CO?飽和濕度培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)

傳代密度：嚴格維持細胞接種密度在 ?2×10^5 個/mL?，最高培養(yǎng)密度不超過1×10^6 個/mL，密度過高會導致細胞活率驟降、表型丟失

傳代操作：無需消化，直接在超凈臺內(nèi)吸取部分細胞懸液，用預熱的新鮮培養(yǎng)基按1:2~1:3的比例稀釋分瓶，補加新鮮培養(yǎng)基后放回培養(yǎng)箱即可。

換液策略：每2~3天半量換液，離心收集細胞后棄去一半舊培養(yǎng)基，加入等量預熱新鮮培養(yǎng)基重懸，避免全量換液導致細胞自分泌生長因子丟失，引發(fā)細胞凋亡。

四、關(guān)鍵質(zhì)控與注意事項

活率要求：正常培養(yǎng)狀態(tài)下細胞活率應長期維持在90%以上，活率低于80%時需檢查SCF、IL-3活性是否失效，或血清批次是否適配。

表型驗證：每10代需通過流式細胞術(shù)驗證FcεRI、CD117（c-Kit）的陽性表達率，確認細胞未發(fā)生表型漂移。

活化實驗標準操作：開展IgE介導脫顆粒實驗時，提前用特異性IgE抗體致敏細胞過夜，次日加入抗原交聯(lián)刺激，30分鐘后檢測上清中β-己糖胺酶釋放率，正?；罨M釋放率應達到總酶活的30%~50%。

禁忌：絕對不能使用不含SCF的培養(yǎng)基長期培養(yǎng)細胞，會在3~5天內(nèi)快速引發(fā)細胞凋亡、肥大細胞核心功能表型丟失。

胰腺星狀細胞包裝：5 × 105次方（1ml）

胰腺星狀細胞包裝：5 × 105次方（1ml）

嬰兒真皮成纖維細胞包裝：5 × 105次方（1ml）

原代表皮角化細胞培養(yǎng)特制添加劑包裝：5/2.5/1ml

原代表皮角化細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基包裝：500/250/100ml

原代成纖維細胞培養(yǎng)特制添加劑包裝：5/2.5/1ml

原代成纖維細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基包裝：500/250/100ml

原代單核細胞培養(yǎng)特制添加劑包裝：5/2.5/1ml

原代單核細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基包裝：500/250/100ml

原代肝實質(zhì)細胞培養(yǎng)特制添加劑包裝：5/2.5/1ml

原代肝實質(zhì)細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基包裝：500/250/100ml

原代骨骼肌細胞培養(yǎng)特制添加劑包裝：5/2.5/1ml

原代骨骼肌細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基包裝：500/250/100ml

原代骨細胞培養(yǎng)特制添加劑包裝：5/2.5/1ml

原代骨細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基包裝：500/250/100

原代滑膜皮細胞培養(yǎng)特制添加劑包裝：5/2.5/1ml

原代滑膜皮細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基包裝：500/250/100

原代內(nèi)皮細胞培養(yǎng)特制添加劑包裝：5/2.5/1ml

原代內(nèi)皮細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基包裝：500/250/100ml

原代平滑肌細胞培養(yǎng)特制添加劑包裝：5/2.5/1ml

原代平滑肌細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基包裝：500/250/100ml

原代軟骨細胞培養(yǎng)特制添加劑包裝：5/2.5/1ml

原代軟骨細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基包裝：500/250/100ml

原代上皮細胞培養(yǎng)特制添加劑包裝：5/2.5/1ml