【儀表網(wǎng) 儀表標(biāo)準(zhǔn)】根據(jù)《中國(guó)認(rèn)證認(rèn)可協(xié)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)管理辦法》規(guī)定，經(jīng)中國(guó)認(rèn)證認(rèn)可協(xié)會(huì)批準(zhǔn)立項(xiàng)，中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院等單位已完成《食品中β-煙酰胺單核苷酸(NMN)含量測(cè)定 高效液相色譜法》(項(xiàng)目編號(hào)：2022TB028)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)的起草工作，形成征求意見(jiàn)稿，現(xiàn)公開(kāi)征求意見(jiàn)。
 

　　β-煙酰胺單核苷酸(β-nicotinamide mononucleotide，NMN)是一種具有生物活性的核苷酸，由磷酸基和含核苷的核糖與煙酰胺反應(yīng)自然形成。在動(dòng)物細(xì)胞中 ， NMN 是 一 種 細(xì) 胞 能 量 來(lái) 源 ， 是 煙 酰 胺 腺 嘌 呤 二 核 苷 酸 (nicotinamide adenine dinucleotide，NAD+)生物合成的代謝物，在細(xì)胞增殖和功能中起著至關(guān)重要的作用。研究表明補(bǔ)充 NMN 可以提高體內(nèi) NAD+含量，從而延緩、改善、防止衰老誘導(dǎo)的代謝紊亂、老年疾病等，所以 NMN 近年來(lái)成為生理醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，并成為醫(yī)藥、功能性食品、化妝品等行業(yè)的珍貴原料。由于 NMN 在我國(guó)還未獲得藥品、保健食品、食品添加劑和新食品原料許可，所以主要作為跨境產(chǎn)品通過(guò)跨境電商平臺(tái)進(jìn)入國(guó)內(nèi)。
 

　　人體可自身合成少量 NMN，也會(huì)通過(guò)攝食西蘭花、卷心菜等果蔬補(bǔ)充 NMN。但由于這些果蔬中 NMN 含量都較少，如果想通過(guò)食物來(lái)補(bǔ)充 NMN 非常困難。所以近年來(lái)以 NMN 為主要活性物質(zhì)的膳食補(bǔ)充劑成為消費(fèi)市場(chǎng)的寵兒，但是諸多亂象也如影隨形，其中最嚴(yán)重的就是部分NMN 產(chǎn)品其中根本不含有 NMN 或者其中 NMN 含量遠(yuǎn)少于其標(biāo)稱(chēng)，達(dá)到以次充好目的。目前國(guó)內(nèi)可以在跨境電商平臺(tái)上購(gòu)買(mǎi)到 NMN 跨境產(chǎn)品，但這類(lèi)產(chǎn)品售價(jià)普遍十分高昂，最便宜的也要 1500 元/瓶，貴的甚至有 20000 元/瓶，如果沒(méi)有做好產(chǎn)品質(zhì)量控制，將嚴(yán)重?fù)p害消費(fèi)者權(quán)益。所以 2021 年 2 月國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)管總局食品經(jīng)營(yíng)司下發(fā)《關(guān)于排查違法經(jīng)營(yíng)“不老藥”的函》(以下簡(jiǎn)稱(chēng)“排查函”)，明確指出目前 NMN 在我國(guó)未獲得藥品、保健食品、食品添加劑和新食品原料許可，不能作為食品進(jìn)行生產(chǎn)和經(jīng)營(yíng)，要求各個(gè)省級(jí)市場(chǎng)監(jiān)管部門(mén)對(duì)相關(guān)經(jīng)營(yíng)者進(jìn)行全面排查。但是目前國(guó)際上還沒(méi)有食品中 NMN 含量測(cè)定方法標(biāo)準(zhǔn)，無(wú)法對(duì)此類(lèi)產(chǎn)品中 NMN含量進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定，就無(wú)法對(duì)相關(guān)食品進(jìn)行監(jiān)管。
 

　　本標(biāo)準(zhǔn)針對(duì)目前國(guó)際上還沒(méi)有食品中 NMN 含量測(cè)定方法標(biāo)準(zhǔn)，無(wú)法對(duì)此類(lèi)產(chǎn)品中 NMN 含量進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定，存在質(zhì)量無(wú)法控制的問(wèn)題，所以需要研制食品中 NMN 含量的檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)。
 

　　本文件按照GB/T 1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件規(guī)定了食品中β-煙酰胺單核苷酸(NMN)含量的高效液相色譜測(cè)定方法。本文件適用于NMN原料和含有NMN的膠囊劑、片劑產(chǎn)品中NMN含量的測(cè)定。
 

　　方法原理：
 

　　試樣經(jīng)50%甲醇水溶液溶解，超聲提取后經(jīng)離心除雜和微孔濾膜過(guò)濾，親水色譜分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。
 

　　儀器和設(shè)備：
 

　　1.高效液相色譜儀，配有柱溫箱。2.電子天平，感量0.00001g。3.渦旋振蕩器。4.超聲波清洗器，功率不低于250W，或相當(dāng)?shù)脑O(shè)備。5.離心機(jī)，不低于10000rpm，或相當(dāng)?shù)脑O(shè)備。
 

　　取樣：
 

　　稱(chēng)取NMN原料、去除膠囊外皮的膠囊劑、片劑NMN產(chǎn)品5g備用。
 

　　NMN原料：
 

　　取試樣混勻，精密稱(chēng)取試樣0.5g(精確到0.001g)置于50mL離心管中，以50mL試樣提取溶液溶解，以10000 rpm的速度離心5min，取250μL上清液置于10 mL容量瓶中，以試樣提取溶液定容至10mL，經(jīng)0.45µm有機(jī)濾膜過(guò)濾，待進(jìn)樣分析，備用。
 

　　膠囊劑、片劑：
 

　　取試樣適量，混勻，研細(xì)，精密稱(chēng)取試樣0.5g(精確到0.001g)置于50mL離心管中，以50mL試樣提取溶液溶解，超聲20 min使試樣充分溶解，以10000 rpm的速度離心5min，取250μL上清液置于10mL容量瓶中，以試樣提取溶液定容至10 mL，經(jīng)0.45µm有機(jī)濾膜過(guò)濾，待進(jìn)樣分析，備用。
 

　　高效液相色譜參考條件：
 

　　高效液相色譜參考條件如下：a) 色譜柱：Supersil HILIC 親水色譜柱，250 mm×4.6 mm，粒徑 5 μm，孔徑 100Å，或性能相當(dāng)者；b) 流動(dòng)相：流動(dòng)相 A(4.5)：流動(dòng)相 B(4.6)=15：85(V/V)等度洗脫；c) 進(jìn)樣體積：10 μL；d) 柱溫：35 ℃；e) 流速：1.0 mL/min；f) 檢測(cè)波長(zhǎng)：235 nm
 

　　試樣溶液的測(cè)定：
 

　　將試樣溶液按儀器參考條件進(jìn)行測(cè)定，以保留時(shí)間定性，得到試樣溶液中NMN組分的峰面積。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得到待測(cè)液中NMN的濃度，平行測(cè)定次數(shù)不少于兩次。待測(cè)樣液中NMN的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性范圍內(nèi)，超過(guò)線(xiàn)性范圍則應(yīng)稀釋后再進(jìn)行分析。NMN原料、NMN片劑產(chǎn)品、NMN膠囊劑產(chǎn)品色譜圖見(jiàn)附錄A。
 

　　分析過(guò)程中，每20次試樣測(cè)定后應(yīng)加入1個(gè)與試樣峰面積相近的標(biāo)準(zhǔn)工作液，如果測(cè)得的值與原值相對(duì)平均偏差超過(guò)5.0%，則應(yīng)重新進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作。
 

　　重復(fù)性：
 

　　在重復(fù)條件下獲得的2次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差須不大于2個(gè)測(cè)定值的算術(shù)平均值的10%。(更多詳情請(qǐng)見(jiàn)附件)