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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> Luxol Fast Blue染色液
| 貨號(hào) | FS-X10060 |
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產(chǎn)品介紹:
用途: 又稱監(jiān)牢藍(lán)髓鞘染色,石蠟切片 注意事項(xiàng): 分化步驟很重要,染色結(jié)果為:髓鞘呈藍(lán)綠色,細(xì)胞核呈紅色。 儲(chǔ)存條件:室溫,避光,12個(gè)月 |
中文名稱:Luxol Fast Blue染色液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:50ml
貨號(hào):FS-X10060
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
白淺灰鏈霉菌分裂周期蛋白16抗體Human UCP1(Mitochondrial brown fat uncoupling protein 1) 人肌酐(Cr)免疫試劑盒
花園芽孢桿菌有絲分裂著絲粒蛋白F抗體Human COQ10B(Coenzyme Q-binding protein COQ10 homolog B, mitochondrial) 人饑餓激(GHRL)免疫試劑盒
蘇云金芽胞桿菌松蠋亞種9號(hào)染色體開放閱讀框115抗體Human QPCTL(Glutaminyl-peptide cyclotransferase-like protein) 人活性氧(ROS)免疫試劑盒
產(chǎn)黃青霉CTDSPL蛋白抗體Human UNC13C(Protein unc-13 homolog C) 人活化受體樣激1(ALK1)免疫試劑盒
草木樨中華根瘤菌CTDSPL2蛋白抗體Human CFB(Complement factor B) 人活化A(ACV-A)免疫試劑盒
黑曲霉乙酰酯相關(guān)蛋白抗體Human ZBED3(Zinc finger BED domain-containing protein 3) 人活化X(FXa)免疫試劑盒
淡紫擬青霉卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白83抗體Human NR1H3(Oxysterols receptor LXR-alpha) 人活化Ⅻ(FⅫa)免疫試劑盒
大腸埃希菌二氫嘧啶相關(guān)蛋白5抗體Human ZBED3(Zinc finger BED domain-containing protein 3) 人活化蛋白C(APC)免疫試劑盒
細(xì)鏈格孢磷化二氫嘧啶樣2抗體Human APOD(Apolipoprotein D) 人混合系列蛋白激樣結(jié)構(gòu)域(MLKL)免疫試劑盒
虎皮粘蓋牛肝菌腦衰蛋白反應(yīng)調(diào)節(jié)蛋白4抗體Human CXCR4(C-X-C chemokine receptor type 4) 人混合淋巴反應(yīng)封閉因子(MLR-Bf)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白87抗體Human AMY2(Amylase Alpha 2, Pancreatic) 人蛔蟲抗體(IgM)免疫試劑盒
松針散斑殼卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白92抗體Human DNMT1(DNA(cytosine-5)-methyltransferase 1) 人黃體生成(LH)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD8抗體Human GREM1(Gremlin-1) 人氧化(XOD)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌大腦亮拉鏈結(jié)構(gòu)域蛋白抗體Human TERT(omerase reverse transcriptase) 人環(huán)磷腺(cAMP)免疫試劑盒
嚙蝕艾肯氏菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白93抗體Human IL17B(Interleukin-17B) 人環(huán)磷鳥(cGMP)免疫試劑盒
星孢鏈霉菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白96抗體Human TLN1(Talin-1) 人環(huán)加氧2(COX-2)免疫試劑盒
型副傷門菌Salmonella│paratyphi A 質(zhì)量規(guī)格:指示劑級(jí)紫萁
假交替單胞菌Pseudoalteromonas│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.96%漿苦味L
: HBUM73202資源名稱: 鏈霉菌 質(zhì)量規(guī)格:IND相思子堿
Luxol Fast Blue染色液動(dòng)物雙歧桿 對(duì)甲苯酰核糖核A1
巴氏醋桿羅旺亞種 1,1'-雙(二-叔丁基膦基)二茂鐵尿二磷葡萄糖轉(zhuǎn)移
光帽磷傘 3-硝基芐高爾基體膜蛋白
芽胞桿 3-乙氧基烯復(fù)合型表皮生長(zhǎng)因子樣結(jié)構(gòu)域蛋白8
尖鐮孢黃瓜專化型(黃瓜枯萎?。?/span> 2-(1-萘基)-5-苯基噁唑低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白2
多布克魯維酵母 3,4-二氨基血紅蛋白β亞基
白僵 3-甲酯跨膜受體蛋白Notch-2
樟疫霉 4-芐氧基-3-苯Ⅴ型膠原α2
醋化醋桿 3-溴甲酯LINGO1
釀酒酵母 3,5-二溴O-連鎖-N-乙酰葡糖基轉(zhuǎn)移
檸檬兩面神 2--4-氟-5-DNA甲基轉(zhuǎn)移3L
熱線鏈霉 4-基-3-氟苯口腔癌致病基因BPIFB2
膠孢 3-(丁基苯氨基)錨蛋白
小孢擬棘殼孢 5,7-二氟-1-印酮脫氫3家族成員A1
沉積物假海源桿 環(huán)烷鈣腎小管間質(zhì)腎炎抗原
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