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貨號	FS-X10062

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：Weil髓鞘染色液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：4×50ml

貨號：FS-X10062

產(chǎn)品介紹:

用途：

髓鞘染色，石蠟切片

注意事項(xiàng)：

主要由weil蘇木素染液、鐵明礬分化液、Weigert分化液等組成。染色結(jié)果為：髓鞘呈黑色，背景呈無色。

儲存條件：室溫，避光，12個月

實(shí)驗(yàn)報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

炭黑曲霉9號染色體開放閱讀框174抗體Human HPX(Hemopexin) 人黑色瘤免疫試劑盒

大腸埃希氏菌6號染色體開放閱讀框64抗體Human TLR5(Toll-like receptor 5) 人黑色免疫試劑盒

類芽孢桿菌屬免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ抗體Human PRKACB(cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit beta) 人核因子κB抑制物激β(IKK-β)免疫試劑盒

亞細(xì)亞菌屬透明質(zhì)介導(dǎo)游走受體抗體Human ARRB2(Beta-arrestin-2) 人核因子κB抑制物激α(IKK-α)免疫試劑盒

東方伊薩酵母周期樣Y1抗體Human CNN1(Calponin-1) 人核因子κB(NF-κB)免疫試劑盒

根瘤菌周期J抗體Human ProHAMP(Hepcidin prohormone) 人核心結(jié)合因子α1,CBFA1/RUNX2 免疫試劑盒

青紫鏈霉菌周期L抗體Human MMP28(Matrix metalloproteinase-28) 人核心蛋白聚糖(DCN)免疫試劑盒

北方蜜環(huán)菌補(bǔ)體C1RL鏈多肽抗體Human CBS(Cystathionine beta-synthase) 人核糖體合成蛋白NSA2同源物(NSA2)免疫試劑盒

釀酒酵母周期M2抗體Human ADAMTS7(A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 7) 人核糖體蛋白S9(RPS9)免疫試劑盒

鏈霉菌周期T2抗體Human EDA(Ectodysplasin-A) 人核糖體蛋白S25(RPS25)免疫試劑盒

白地霉周期K抗體Human TNC(Tenascin) 人核糖核抑止劑(RNH1/PRI/RNH)免疫試劑盒

天藍(lán)褐鏈霉菌抗菌肽CAMP抗體Human IL36A(Interleukin-36 alpha) 人核糖核,核糖核A家族,(肝臟,嗜性粒源性神經(jīng))(RNASE2)免疫試劑盒

釀酒酵母5號染色體開放閱讀框4抗體Human HPX(Hemopexin) 人核糖核(RNASE1/RIB1/RNS1)免疫試劑盒

大腸埃希菌4號染色體開放閱讀框44抗體Human MAPT(Microtubule-associated protein tau) 人核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)免疫試劑盒

膠孢4號染色體開放閱讀框33抗體Human TLR5(Toll-like receptor 5) 人核基質(zhì)蛋白22(NMP-22)免疫試劑盒

pET-23a4號染色體開放閱讀框42抗體Human PRKACB(cAMP-dependent protein kinase catalytic subunit beta) 人核黃激(RFK)免疫試劑盒

Microsphaeropsis arundinisMicrosphaeropsis│arundinis 質(zhì)量規(guī)格：IND紫蘇烯

缺陷短波單胞菌Brevundimonas│diminuta 質(zhì)量規(guī)格：AR;IND苦蒿

立枯絲核菌Thanatephorus│cucumeris (A.B. Frank) Donk 質(zhì)量規(guī)格：0.9西瑞香
Weil髓鞘染色液鵝膏屬 2,4-二溴精代琥珀合成1

丁香輪絲鏈輪絲化1-十六烷基-3-甲基咪唑肝堿性磷

土壤小單胞 1,2-二苯分泌磷蛋白2

黑木耳 5--2-拉薩熱病IgG抗體

*喜溫硫桿 2-甲基-5-氨基-2H-四氮唑γ-分泌亞單位

核鏈霉 N,N'-二甲基草酰泛特異性蛋白

腐爛粘束梗霉 2-肼基苯并噻唑?qū)ρ趿?

棒曲霉 2-苯并噁唑癌抗原27-29

球孢白僵二單乙酯鹽糖類抗原72-4

金9401(金針菇) 順-3-己烯順-3-己烯酯珠蛋白A

名稱 2-氨基噻唑鹽鹽肉堿棕櫚?；D(zhuǎn)移1

黃柄曲霉苯甲酰乙脂酰COA脫氫

黑曲霉反式-4-甲氧基肉桂異辛酯烯酰-CoA水合

盾殼霉 2-乙氧基苯甲硫解

釀酒酵母芐基2-萘羥酰CoA脫氫
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)