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線粒體超氧化物染色試劑盒-M13

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-11 16:13:52瀏覽次數(shù):247次

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貨號 FS-X9860
產(chǎn)品介紹:
M13線粒體超氧化物染色/檢測試劑盒是利用M系列探針進行線粒體超氧化物特異性染色的試劑盒。本試劑盒中的M13線粒體超氧化物染色探針為紅色熒光標記的線粒體探針,具有510/580nm 的大激發(fā)/發(fā)射波長。
M13線粒體超氧化物染色探針是一種細胞滲透型的對活細胞中的線粒體體進行選擇性染色的一類新型熒光染料,該探針可以選擇性標記線粒體,包含標記線粒體的弱巰基反應性的氯甲基官能團。只需簡單孵育

產(chǎn)品介紹:

M13線粒體超氧化物染色/檢測試劑盒是利用M系列探針進行線粒體超氧化物特異性染色的試劑盒。本試劑盒中的M13線粒體超氧化物染色探針為紅色熒光標記的線粒體探針,具有510/580nm 的大激發(fā)/發(fā)射波長。

M13線粒體超氧化物染色探針是一種細胞滲透型的對活細胞中的線粒體體進行選擇性染色的一類新型熒光染料,該探針可以選擇性標記線粒體,包含標記線粒體的弱巰基反應性的氯甲基官能團。只需簡單孵育細胞,即可穿過細胞膜并直接聚集在活性線粒體上。一旦進入線粒體后,快速被超氧化物氧化,并產(chǎn)生紅色熒光。M13線粒體超氧化物染色探針只可被超氧化物氧化,而不被其他活性氧類(ROS)和活性氮類(RNS)氧化。氧化產(chǎn)物結(jié)合核酸后,可產(chǎn)生大量紅色熒光。

儲存條件:染料-20℃避光保存;避免反復凍融;稀釋液2-8℃保存。

按每個樣用200μl染料計,試劑盒可以做30-150個樣或60-300個樣;

按每個樣用100μl染料計,試劑盒可以做60-300個樣或120-600個樣。

有效期:六個月。

中文名稱:線粒體超氧化物染色試劑盒-M13

英文名稱:

產(chǎn)品規(guī)格:30T|50T

貨號:FS-X9860

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

N-乙?;咸烟牵藴势罚┯⑽拿?NilotinibC-藻藍/藻藍蛋白/藻青蛋白抗體包裝25g

Nateglinide(標準品)英文名: Spiramycin色P450 1A1抗體包裝5g

Nifedipine(標準品)英文名: Spiramycin絲/蘇蛋白質(zhì)激II α抗體包裝1mg

Norepinephrine Bitartrate(標...英文名: Spironolactone2號染色體開放閱讀框66抗體包裝5mg

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P-基異酯(標準品)英文名: Carbamazepine1號染色體開放閱讀框226抗體包裝25g

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Prednisone Acetate(標準品)英文名: Felodipine22號染色體開放閱讀框32抗體包裝100g

Prednisone(標準品)英文名: FelodipineCD5L抗體包裝25g

Pregnenolone Acetate(標準品)英文名: 6-TG/ThioguanineCD6抗體包裝500g

靈芝菌Ganoderma│lucidum (Curtis) P. Karst. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品血紅蛋白H試劑盒雪膽 ;Curcurbitacin

: ATCC51331資源名稱: 嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌 質(zhì)量規(guī)格:>98%血紅蛋白C試劑盒纈草三酯;Valtrate

乳乳球菌Lactococcus│lactis 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,USP/BP血紅蛋白試劑盒香荊芥酚;5-Isopropyl-2-m
線粒體超氧化物染色試劑盒-M13根瘤 2-氨基-5-氟苯并噻唑抗父體性抗體

土壤桿屬 2H-吡啶并[3,2-b]-1,4-雜氧-3(4H)-酮漢坦病IgM抗體

加拿大帚霉 2,5-二溴肺衣原體IGM

球毛殼 2H-吡啶并[3,2-b]-1,4-雜氧-3(4H)-酮黑色

茶樹菇 1,3-二氫-5,6-二甲基-2H-苯并咪唑-2-酮脫氧核糖核Ⅰ

潰瘍棒狀桿 2,5-二溴SCAMP3

羅磷傘 N-基芐解偶聯(lián)蛋白 1

赭綠青霉 1-(3-基)-4-甲基哌her2-ecd

癤葡萄座腔 5-并[C][1,2,5]惡二唑分泌型卷曲相關蛋白3

馬拉交替紅色桿 5-并[C][1,2,5]惡二唑鳥

黃綠木霉 4--2-氟肉桂肽基精脫亞2

德氏乳桿保加利亞亞種 環(huán)己碳鹽肽基精脫亞4

喜溫愛達荷犁頭霉 4-氨基吡唑并[3,4-d]嘧啶結(jié)核桿抗體

異常威克漢姆酵母 3-甲基噻吩-2-羧神經(jīng)絲蛋白L

熱葡糖地芽孢桿 對己基溴苯白介4受體

 


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