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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> 巴氏染色液(EA50)
| 貨號(hào) | FS-X9910 |
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中文名稱:巴氏染色液(EA50)
英文名稱:Papanicolaou EA50
產(chǎn)品規(guī)格:4×100ml|4×250ml|4×500ml
貨號(hào):FS-X9910
產(chǎn)品介紹:
用途: 細(xì)胞學(xué)樣本常規(guī)染色,尤其適用于婦科細(xì)胞學(xué)涂片染色、細(xì)胞脫落標(biāo)本染色。 注意事項(xiàng): 巴氏染色液是用蘇木素、橙黃、磷鎢酸等配制而成,用于處理分泌物等細(xì)胞脫落標(biāo)本,細(xì)胞核呈藍(lán)色或黑色,角化鱗狀細(xì)胞胞漿呈粉紅或橘紅色。 儲(chǔ)存條件:室溫,12個(gè)月 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
*美味牛肝菌肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白1抗體Human HSPB2 小鼠結(jié)蛋白(Des)免疫試劑盒
香菇β淀粉樣前體蛋白結(jié)合蛋白2抗體(X11β)Human HuR 小鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)免疫試劑盒
魯氏毛霉乙酰結(jié)合蛋白抗體Human HSPB8 小鼠角化生長(zhǎng)因子(KGF/FGF-7)免疫試劑盒
糾纏青霉磷化分裂周期蛋白16抗體Human HSPB7 小鼠角化內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)免疫試劑盒
腐皮鐮孢白血病相關(guān)蛋白AHI1抗體Human HSN2 小鼠膠質(zhì)系來源的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)免疫試劑盒
阿舒多囊霉活化誘導(dǎo)胞嘧啶核脫抗體Human HURP 小鼠膠原I(Collagenase I)免疫試劑盒
淡紫紫霉三磷腺結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白9抗體Human HUS1 小鼠膠原吡啶交聯(lián)(PYD)免疫試劑盒
玫紅假裸囊菌ADP核糖基化因子3抗體Human HSPA13 小鼠降鈣原(PCT)免疫試劑盒
乳酒假絲酵母含酰tRNA合成結(jié)構(gòu)域1抗體Human HSP20 小鼠降鈣基因相關(guān)肽(CGRP)免疫試劑盒
山岡單胞菌粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體Human HUS1B 小鼠降鈣(CT)免疫試劑盒
哈茨木霉卡爾曼綜合癥基因1抗體Human HSPB2 小鼠堿性磷(ALP)免疫試劑盒
根瘤菌含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族7抗體Human HSPA1L 小鼠堿性成纖維生長(zhǎng)因子(bFGF)免疫試劑盒
尖孢含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族17抗體Human HSPB7 小鼠甲狀腺抗體(TAb)免疫試劑盒
含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族12抗體Human HUS1B 小鼠甲狀腺(T4)免疫試劑盒
淡黃木層孔菌鈉ATP通道蛋白抗體Human HSPA1L 小鼠甲狀腺球蛋白(TG)免疫試劑盒
雞縱菌AGXT2L2蛋白抗體Human HSPB2 小鼠甲狀腺過氧化物(TPO)免疫試劑盒
: Ye1110資源名稱: 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌 質(zhì)量規(guī)格:比活度:>1.2 U/mg,BC白介15試劑盒棗仁皂B1
芽孢八疊球菌(加詞待譯)Sporosarcina│globispora 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR白介13試劑盒3,4,5-三咖啡酰奎寧
擬盤多毛孢Pestalotiopsis│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR白介12受體亞基β-1試劑盒黃皮
巴氏染色液(EA50)乳乳球 3,4-二氟苯磺酰酮還原1C3
叢梗孢屬 3-甲基-2-人類嗜TⅠ型病抗體
燼灰吸水鏈霉 鹽阿莫洛芬吻
紫棕炭團(tuán) 苯Mdm2 p53結(jié)合蛋白同源物
弗氏鏈霉 2-萘-6-磺酰磺基轉(zhuǎn)移 1A2
地衣芽孢桿 2-溴-2',4'-二氟苯乙酮狀瘤病抗原
劣質(zhì)食用油鑒別速測(cè)包 N,N-二甲基癸胰島自身抗體
肉梭 A型* 4,4'-二苯乙烯二羧N-甲基-D-天冬受體抗體
WAL 14507 [DSM 19850] 表沒食子兒茶沒食子酯蛋白激活受體2
假灰鏈霉 鄰苯二甲二(2-丁氧基乙基)酯仙臺(tái)病
嗜糖黃桿 2,6-二甲基-4-庚弗林蛋白
雙重輪絲鏈霉 2-氨基蒽醌載脂蛋白A1抗體
頂青霉 烯酰氧乙基基化內(nèi)皮型一氧化氮合
Nesterenkonia flava 4-溴巴豆甲酯磷化內(nèi)皮型一氧化氮合
釀酒酵母 月桂磷化內(nèi)皮型一氧化氮合
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