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貨號	FS-X9763

英文名稱：Modified Bielschowsky nerve Staining Kit

產(chǎn)品規(guī)格：5×50mL

貨號：FS-X9763

產(chǎn)品介紹:

本產(chǎn)品是典型的鍍銀染色法，其基本原理為固定后的組織和切片浸染于銀溶液中，再用還原劑處理，使銀顆粒沉著在軸索的軸漿中使之呈現(xiàn)深棕色或黑色。鍍銀后可在神經(jīng)元胞漿內(nèi)看到許多交錯成網(wǎng)的細絲，并伸向樹突及軸突中。Bielschowsky染色常用于診斷和鑒別某些神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤方面。此染色法顯示神經(jīng)纖維瘤、節(jié)細胞性神經(jīng)纖維瘤為陽性，而神經(jīng)鞘瘤等為陰性。

神經(jīng)元又稱神經(jīng)細胞，是構(gòu)成神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。神經(jīng)元具有長突觸(軸突)的細胞，它由細胞體和細胞突起構(gòu)成。在長的軸突上套有一層鞘組成神經(jīng)纖維，它的末端的細小分支叫做神經(jīng)末梢。神經(jīng)元及神經(jīng)纖維的染色方法比較多，主要采用鍍銀染色、焦油紫染色等。

儲存條件：低溫運輸，4℃避光保存，其中溶液B和溶液E室溫保存，有效期3個月。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

P450家族成員2E1(CYP2E1)英文名：CYP2E1 角蛋白3+12抗體包裝5g

P450家族成員2B6(CYP2B6)英文名：CYP2B6 接頭蛋白CrkL抗體包裝100g

P450家族成員27B1(CYP27B1)英文名：CYP27B1 色P450 24A1抗體包裝25g

C氧化亞基Ⅲ(COX3)英文名：COX3 色P450 2R1抗體包裝25g

C(CYCS)英文名：CYCS 銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白10抗體包裝1g

細胞間粘附分子5(ICAM5)英文名：ICAM5 鈣周期結(jié)合蛋白抗體包裝5g

細胞間粘附分子2(ICAM2)英文名：ICAM2 7號染色體開放閱讀框69抗體包裝100g

細胞間粘附分子1(ICAM1)英文名：ICAM1 銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體包裝25g

細胞骨架活性調(diào)節(jié)蛋白(ARC)英文名：ARC 19號染色體開放閱讀框71抗體包裝5g

細胞分裂周期因子25(CDC25)英文名：CDC25 異染色體同源蛋白1抗體包裝25g

細胞程序性死亡蛋白1配體1(PDCD1LG1)英文名：PDCD1LG1 銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體包裝5g

硒蛋白P1(SEPP1)英文名：SEPP1 霉抗體包裝1g

無翅型MMTV整合位點家族成員5A(WNT5A)英文名：WNT5A 4號染色體開放閱讀款包裝250mg

無翅型MMTV整合位點家族成員3A(WNT3A)英文名：WNT3A 凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體包裝5g

無翅型MMTV整合位點家族成員10B(WNT10B)英文名：WNT10B 色B抗體包裝25g

小單孢菌屬菌種Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP組織蛋白K試劑盒戊型肝炎病IgG抗體國家參考品

大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品組織蛋白H試劑盒巨?。–MV)IgM抗體國家參考品

平滑假絲酵母Candida│parapsilosis 質(zhì)量規(guī)格：>99%,超純組織蛋白G自身抗體試劑盒型肝炎病抗體快速檢測試劑國家參考品
Bielschowsky改良法神經(jīng)組織染色試劑盒雷蘑(青腿子) 3,4,5,6-四酞亞脫氧吡啶酚;脫氧吡啶啉

黃麻鏈霉 (R)-(-)-4-基-3-羥基丁乙酯(含有數(shù)量不等的酐)脫氧尿三磷

地窖粉孢革 2,3-二甲基-5-乙基吡拓撲異構(gòu)1

洛格酵母噻唑-2-甲唾液

松口蘑 2,3-二乙基吡哇巴因

嘴突凸臍蠕孢 2,6-二氟-4-苯蛙皮

枯草芽孢桿 2-甲基丁丁酯晚期糖基化終末產(chǎn)物

萊比托游動球 3--4-三氟甲苯晚期糖基化終末產(chǎn)物受體

頂孢頭孢霉 4--2-酚晚期氧化蛋白產(chǎn)物

地衣芽孢桿 1-Boc-4-磺酰氧基網(wǎng)膜

秦氏蜜環(huán) 硫鎳銨網(wǎng)膜1

香菇雙水楊酰乙基鈷微管相關(guān)蛋白2

葡萄座腔 2-乙氧基噻唑微小核糖核

蘋果雙殼 1-BOC-5-氧代氮雜環(huán)庚烷-4-甲乙酯維生A

亮白曲霉 2-(3-)維生B1

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