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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針

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更新時間:2022-05-11 14:56:27瀏覽次數(shù):201次

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貨號 FS-X9775
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針正在熱銷的產(chǎn)品:Cyclin F 周期F抗體正丁 ≥99.9%, FCC
Cyclin G 周期G抗體水楊丁酯 99%
Cyclin H 周期H抗體丁酯 ≥99%, FCC
Cystatin 3/CST3 胱抑C/半胱氨蛋白抑制劑C抗體苯縮 98%
Cytoglobin 球蛋白抗體苯縮 98%, Kosher
CYLD 微管結(jié)合蛋白CYLD抗體香茅 98%
pho

產(chǎn)品介紹:

本探針是一種內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針,可以用于活細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性熒光染色。本探針為采用Molecular Probes公司的BODIPY TR進(jìn)行了熒光標(biāo)記的glibenclamide,分子量為915.23。

Glibenclamide即glyburide,中文名為格列苯脲,是一種2型糖尿病治療藥物,可以結(jié)合主要定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的sulphonylurea受體。因此熒光標(biāo)記的glibenclamide就可以用作內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性的熒光探針。

本探針對于細(xì)胞的毒性極低。而傳統(tǒng)的DiOC6(3)對ER染色的同時也對細(xì)胞有一定的毒性。本探針呈紅色熒光,檢測時的大激發(fā)波長為587nm,大發(fā)射波長為615nm。

本探針按照后附的使用說明染色后,用等固定后染色效果可以被部分保留。本品提供了探針稀釋液,使本探針的使用更加便捷。按照1:1000的比例稀釋,可以配制20ml探針工作液;按照1:3000的比例稀釋,可以配制60ml探針工作液。

儲存條件:-20℃避光,有效期6個月。

中文名稱:內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針

英文名稱:Endoplasmic Reticulum Tracker Red

產(chǎn)品規(guī)格:20μl

貨號:FS-X9775

實(shí)驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

溶血?;D(zhuǎn)移3(LPCAT3)英文名:LPCAT3 貓眼綜合征染色體候選基因6抗體包裝25g

溶血酰基轉(zhuǎn)移2(LPCAT2)英文名:LPCAT2 21號染色體開放閱讀框2抗體包裝25mg

溶血?;D(zhuǎn)移1(LPCAT1)英文名:LPCAT1 9號染色體開放閱讀框86抗體包裝25G

溶血磷脂受體3(LPAR3)英文名:LPAR3 21號染色體開放閱讀框128抗體包裝5G

溶體性磷2(ACP2)英文名:ACP2 6號染色體開放閱讀框62抗體包裝100g

妊娠關(guān)聯(lián)血漿蛋白A(PAPPA)英文名:PAPPA CCZ1蛋白抗體包裝500g

熱休克轉(zhuǎn)錄因子4(HSF4)英文名:HSF4 腦蛋白5抗體包裝1g

熱休克轉(zhuǎn)錄因子1(HSF1)英文名:HSF1 21號染色體開放閱讀框58抗體包裝5g

熱休克蛋白β8(HSPβ8)英文名:HSPβ8 20號染色體開放閱讀框43抗體包裝1g

熱休克蛋白β6(HSPβ6)英文名:HSPβ6 9號染色體開放閱讀框43抗體包裝5g

熱休克蛋白β2(HSPβ2)英文名:HSPβ2 幾丁質(zhì)3樣蛋白3抗體包裝100ml

熱休克蛋白40(HSP40)英文名:HSP40 趨化樣因子超家族成員2抗體包裝500ml

染色質(zhì)裝配因子1亞基B(CHAF1B)英文名:CHAF1B 趨化樣因子超家族成員2亞型1抗體包裝1g

染色質(zhì)域解旋DNA結(jié)合蛋白4(CHD4)英文名:CHD4 18號染色體開放閱讀框1抗體包裝5g

染色框同源物3(CBX3)英文名:CBX3 色c氧化VIIA亞型2抗體包裝100g

黑曲霉Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格:> 95%,BR主要組織相容性復(fù)合體,II類,DQα2試劑盒知母皂E;Anemarsaponin

蜜蜂生球擬酵母Torulopsis│apicola 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>95%,標(biāo)準(zhǔn)品周期依賴性激5試劑盒知母皂元;Sarsasapogenin

乳乳球菌Lactococcus│lactis 質(zhì)量規(guī)格:純度> 98%,BR,可用于培養(yǎng)周期依賴性激4試劑盒醉椒;Kavain
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針假交替單胞 2-異基乙酰乙乙酯血清腫瘤相關(guān)物質(zhì)

豬瘟病 2,3,5-三氟溴苯血清總補(bǔ)體

擬青霉 2-氨基異煙乙酯血栓海綿蛋白

蘇云金芽胞桿肯尼亞亞種 2-氨基煙乙酯血栓前體蛋白

四川散斑殼 N-(芐氧羰基)-1H-吡唑-1-甲脒血栓A2

柱狀田頭菇 乙異辛酯血栓B2

耐冷冷桿 乙異丁酯血栓調(diào)節(jié)蛋白

栗疫 2,4,6-基-3-環(huán)己烯-1-甲;異環(huán)檸檬血糖

梨葉殼小圓孢 代單丁基錫血纖蛋白原降解產(chǎn)物

熱帶假絲酵母 2,4-二-3,5-二酚血纖維蛋白溶原

節(jié)桿 N-BOC-1H-吡唑-1-甲脒血小板VASP;P2Y12

Pseudarthrobacter 3,4,5-氧基苯乙血小板第三因子

微桿 3-甲基硫代已酯血小板第四因子

釀酒酵母 普施安藍(lán) MX-R血小板反應(yīng)蛋白;凝血敏感蛋白1

深藍(lán)鐮孢 3--2-甲血小板反應(yīng)蛋白4

 


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