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貨號	FS-X10075

產(chǎn)品介紹:

用途：

神經(jīng)HRP示蹤TMB(四甲基聯(lián))顯色，反應較DAB法靈敏。

注意事項：

主要由TMB孵育液、、乙酸鈉緩沖液等組成，染色后呈藍色。

儲存條件：4℃，避光，12個月

中文名稱：神經(jīng)HRP示蹤顯色液(TMB法)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：50T

貨號：FS-X10075

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

金針菇組織蛋白G抗體Human RAG1(V(D)J recombination-activating protein 1) 人法尼基二磷法尼基轉(zhuǎn)移1(FDFT1)免疫試劑盒

解脂鹽紅菌激分子B7-1蛋白抗體Human DUT(Deoxyuridine 5′-triphosphate nucleotidohydrolase, mitochondrial) 人法尼X受體(FXR)免疫試劑盒

鴨疫里氏桿菌1號染色體開放閱讀框145抗體Human SCARB1(Scavenger receptor class B member 1) 人二?；视?DAG/DG)免疫試劑盒

南類芽孢桿菌20號染色體開放閱讀框186抗體Human NFATC1(Nuclear factor of activated T-cells, cytoplasmic 1) 人二肽基肽Ⅳ(DPPⅣ)免疫試劑盒

猬木霉角蛋白7抗體Human HTN3(Histatin-3) 人二氫嘧啶脫氫[NADP+](DPYD)免疫試劑盒

溶血不動桿菌基因型4間隙連接蛋白26抗體Human SRD5A1(3-oxo-5-alpha-steroid 4-dehydrogenase 1) 人二氫嘧啶樣3(DPYSL3)免疫試劑盒

貝倫格葡萄座腔菌膜輔蛋白抗體Human EPCA2(Early Prostate Cancer Antigen 2) 人二氫嘧啶樣2(DPYSL2)免疫試劑盒

鴨疫里氏桿菌F肌動蛋白α1亞基抗體Human MADCAM1(Mucosal addressin cell adhesion molecule 1) 人二羥基賴正己(DHLNL)免疫試劑盒

抗生鏈霉菌CD8抗體Human NEO1(Neogenin) 人二磷腺(ADP)免疫試劑盒

黃桿菌CD8抗體Human NAIP(Baculoviral IAP repeat-containing protein 1) 人二磷尿核葡糖基轉(zhuǎn)移2家族肽B4(UGT2B4)免疫試劑盒

小孢根霉原變種表面趨化因子受體2抗體Human PACRG(Parkin coregulated gene protein) 人二氧化(DAO)免疫試劑盒

中慢生根瘤菌胱抑B/半胱蛋白抑制劑B抗體Human CX3CR1(CX3C chemokine receptor 1) 人兒茶抑免疫試劑盒

溜曲霉趨化樣蛋白抗體Human JUP(Junction plakoglobin) 人兒茶(CA)免疫試劑盒

多孢木霉角蛋白20抗體Human CFL1(Cofilin-1) 人鵝膏蕈堿免疫試劑盒

蘇云金芽胞桿菌鈣激活的中性蛋白2抗體Human EPCA2(Early Prostate Cancer Antigen 2) 人多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)免疫試劑盒

臭曲霉CD45RO抗體Human IZUMO1(Izumo sperm-egg fusion protein 1) 人多效生長因子(PTN)免疫試劑盒

短鏈孢霉屬Selenotila│sp. 質(zhì)量規(guī)格：鈉型榿木

根霉Rhizopus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：for GC,≥99.5%(GC)款冬

Methanobrevibacter smithiiMethanobrevibacter smithii 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥99.5%(GC)偽原薯蕷皂
神經(jīng)HRP示蹤顯色液(TMB法)水稻漢納酵母 N'-芴甲氧羰基-N-芐氧羰基-L-賴硝還原

需鈉弧 1-萘磺酰血紅氧合1

枯草芽孢桿 2,5-二血凝;凝集

禽腦脊髓炎病 2,5-二氟溴芐煙酰腺二核磷

大靈芝 1-丁基-3-甲基咪唑溴鹽氧化型

*櫻桃鏈格孢 2,6-二氟葉綠a

漢遜德巴利酵母 2-溴-4-甲基-5-氟吡啶葉綠b

稀疏鏈霉稀疏變種 1-N-Cbz-3-基葉綠

芽孢桿吲唑-6-

三葉草根瘤 3-溴噠一氧化氮

產(chǎn)黑色鏈霉 2,5-二氨基苯磺胰蛋白抑制劑

黃桿 3-氨基-5-氟甲酯乙烯

藍色犁頭霉 3-溴-2-氟-4-乙酰羧化