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上海撫生實業(yè)有限公司
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VG染色液

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產品型號

品       牌其他品牌

廠商性質經銷商

所  在  地上海市

更新時間:2022-05-16 14:41:08瀏覽次數(shù):228次

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貨號 FS-X9966
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中文名稱:VG染色液

英文名稱:

產品規(guī)格:100ml

貨號:FS-X9966

產品介紹:

用途:

膠原纖維染色,簡稱V.G染色液

注意事項:

臨用時飽和PA溶液:酸性復紅=9:1混合后使用。

儲存條件:室溫,避光,12個月

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

香菇腫瘤轉移抑制蛋白1抗體Human CEP55 山羊骨形成蛋白2(BMP-2)免疫試劑盒

黃色短桿菌半胱蛋白蛋白-12抗體Human  CD9(CD9 antigen) 山羊骨堿性磷(BALP)免疫試劑盒

三葉草根瘤菌角蛋白17抗體Human CD94 山羊骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌CD38抗體Human CEP63 山羊骨保護(OPG)免疫試劑盒

果生鏈核盤菌CD38抗體Human CDC25A 山羊還原(GSR)免疫試劑盒

Paracoccus碳酐1抗體Human CD32 山羊過氧化物(GSH-PX)免疫試劑盒

異常漢遜酵母碳酐2抗體Human CDC14B 山羊孤腓肽(OFQ/N)免疫試劑盒

露濕漆斑菌絲/蘇蛋白質激抗體Human CEP68 山羊睪(T)免疫試劑盒

玫瑰色紅球菌α-連環(huán)蛋白抗體(鈣粘蛋白相關蛋白)Catenin αHuman CEP290 山羊肝脂(HL)免疫試劑盒

巨獸芽孢桿菌癌易感基因2相互作用蛋白抗體Human CD4(T-cell surface glycoprotein CD4) 山羊膽囊收縮/縮膽囊八肽(CCK-8)免疫試劑盒

肺炎鏈球菌質連接蛋白1抗體Human CEP350 山羊催乳(PRL)免疫試劑盒

地衣芽孢桿菌盤狀結構域受體蛋白2抗體Human  CD9(CD9 antigen) 山羊催產(OT)免疫試劑盒

清酒假絲酵母膜糖蛋白CD200抗體Human CEP44 山羊促性腺激釋放激(GnRH)免疫試劑盒

布拉克須霉胰羧肽A1抗體Human CD81(CD81 antigen) 山羊促生長激釋放激(GHRH)免疫試劑盒

干酪乳桿菌羧肽A2抗體Human CEP55 山羊促腎上腺皮質激釋放因子(CRF)免疫試劑盒

茄鏈格孢腦源性免疫球蛋白超家族蛋白3抗體Human CD94 山羊促腎上腺皮質激(ACTH)免疫試劑盒

副流感病毒Respirovirus│Parainfluenza virus 質量規(guī)格:>98%,BRPodocin 蘿卜硫

黃海芽孢桿菌Bacillus│marisflavi 質量規(guī)格:BRPL7抗體/抗蘇酰tRNA合成試劑盒羅丹明B

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質量規(guī)格:BRPL12抗體/抗酰tRNA合成試劑盒六氫吡啶羧
VG染色液匍枝根霉(黑根霉) 3--2-氟苯甲包柔氏螺旋體

柳松菇 5-溴-2,3-二氟苯甲MBD3

波狀曲霉 2-溴-6-氟苯甲核纖層蛋白B2

果香地霉 2--5-氟異煙發(fā)育調節(jié)GTP結合蛋白2

表皮葡萄球 托麥汀N-myc下游調節(jié)基因2

孟氏假單胞 2-溴吡啶-4-甲甲酯酮脫氫E2

靈芝 反-1,4-二氨基環(huán)已烷CD209分子

海南小雙孢 苯二胸激1

庫德里阿茲威畢赤酵母 2,3-二溴-6-丁型肝炎IgM抗體

尖孢鐮刀胡麻?;?/span> 3-溴噻-2-羧甲酯白介36α

中慢生華癸根瘤 3--2,4-二氟苯白介36β

Ochrobactrum 2-氟-4-煙血管內皮生長因子受體2

曲霉 2-正基烷-1,3-二抗肌炎抗體譜3抗體IgG

節(jié)桿屬 1-甲基-4-硝基-1H-吲唑內皮脂肪

食砜節(jié)桿 5-甲氧基水楊酪蛋白激2

 


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