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貨號(hào)	FS-X10173

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

貨號(hào)：FS-X10173

產(chǎn)品介紹:

用途：

用于生物化學(xué)活性分析、免疫分析以及組織和細(xì)胞的組織化學(xué)染色，多用于轉(zhuǎn)基因植物的GUS基因表達(dá)。

注意事項(xiàng)：

染色原理是適宜的反應(yīng)條件下，β-葡萄糖苷酶(GUS)可將X-Gluc水解成藍(lán)色物質(zhì)，該物質(zhì)不溶解于轉(zhuǎn)基因的細(xì)胞核組織中的靛藍(lán)物質(zhì)，具有GUS活性的部位或位點(diǎn)呈現(xiàn)藍(lán)色或藍(lán)色斑點(diǎn)，可用肉眼或顯微鏡觀察到。

儲(chǔ)存條件：-20℃，避光，12個(gè)月

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

巴氏醋桿菌GDP甘露糖焦磷化抗體Human WDR46 *(CAT)免疫試劑盒

柱孢犁頭霉G蛋白偶聯(lián)受體171抗體Human WDR18 還原(GR)免疫試劑盒

新城疫病神經(jīng)膜糖蛋白M6bHuman WDR55 S轉(zhuǎn)移(GSTs)免疫試劑盒

球孢白僵菌鳥(niǎo)激GMK抗體Human WARS2 睪(T)免疫試劑盒

密褐褶菌半乳糖腦脂抗體Human WDR16 分泌型免疫球蛋白A(sIgA)免疫試劑盒

高盧蜜環(huán)菌G蛋白偶聯(lián)受體激5抗體Human WBP1 單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)免疫試劑盒

韓芝GTP結(jié)合蛋白R(shí)EM1抗體Human WBP11 促卵泡(FSH)免疫試劑盒

楚氏喜鹽芽孢桿菌磷化糖原合激-3α抗體Human WASL 雌激(E)免疫試劑盒

微桿菌生長(zhǎng)分化因子7抗體Human ACHE(Acetylcholinesterase) 雌二(E2)免疫試劑盒

外外安德倫茨氏菌葡萄糖激調(diào)節(jié)蛋白抗體Human WBP2 層連蛋白/板層(LN)免疫試劑盒

樟疫霉γ谷酰半胱合成抗體（γ-GCSc）Human VSTM2L 補(bǔ)體蛋白4(C4)免疫試劑盒

佐貝爾梅奇酵母GCOM1蛋白抗體Human VSX2 補(bǔ)體蛋白3(C3)免疫試劑盒

異常威克漢姆酵母葡萄糖果糖還原2抗體Human VSX1 白三烯C4(LTC4)免疫試劑盒

大腸埃希菌膠質(zhì)系源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體α1樣蛋白抗體Human VSX1 白介8(IL-8/CXCL8)免疫試劑盒

金龜子假絲酵母GHDC蛋白抗體Human VSX2 白介2受體(IL-2R)免疫試劑盒

大腸埃希菌甘油激5抗體Human LECT2(Leukocyte cell-derived chemotaxin-2) 白介15(IL-15)免疫試劑盒

ATCC19098=CIP106986=DSM20167=KCTC3196=LMG16694=MTCC1528=NBRC12678=NRRLB-14730.資源名稱: 硫磺色節(jié)桿菌質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC≥97.0%(GC)11-O-羅漢果V

間座殼Diaporthe│sp. 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品, ≥99.5% (GC)二咖啡酰菊苣

Pseudonocardia alaniniphilaPseudonocardia│alaniniphila 質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,≥99%(GC)3，4，5-三咖啡?？鼘?/span>
GUS染色液枯草芽孢桿 3--2-甲苯叉頭框蛋白01

白僵 6-噠-3-羧叉頭型基因P3

普通變形桿 2-乙?；?5-硝基吡啶腸三葉因子

蘇云金芽孢桿蠟螟亞種 2-氨基-3,5-二溴苯甲腸脂肪結(jié)合蛋白

墳?zāi)构?jié)桿 2,6-二氟溴芐超敏C反應(yīng)蛋白

水生黃桿反式-4-氨基環(huán)己鹽鹽超氧化物歧化

費(fèi)氏中華根瘤 1,4-二(2-苯并惡唑基)萘超氧化物歧化1

長(zhǎng)雙歧桿乳清單水合物沉默調(diào)節(jié)蛋白1

串珠鐮孢 2-氨基苯并噻唑-6-羧乙酯成熟促進(jìn)因子

黃海鞘氨盒 2,4,5-三成纖維生長(zhǎng)因子

枯草芽胞桿枯草亞種 3--2,5-二氟吡啶成纖維生長(zhǎng)因子2

針葉樹(shù)散斑殼 2--4-甲成纖維生長(zhǎng)因子21

醬油曲霉 2-丁基咪唑成纖維生長(zhǎng)因子23

露濕漆斑次叔丁酯穿孔;成孔蛋白

節(jié)桿 2,4-二氨基-6-[2-(2-十一烷基-1-咪唑基)乙基]-1,3,5-三雌二

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