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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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BCIP/NBT堿性磷酸酯酶顯色試劑盒

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產(chǎn)品型號(hào)

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-05-11 15:12:06瀏覽次數(shù):242次

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貨號(hào) FS-X9795
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中文名稱:BCIP/NBT堿性磷酸酯酶顯色試劑盒

英文名稱:BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit

產(chǎn)品規(guī)格:共100ml

貨號(hào):FS-X9795

產(chǎn)品介紹:

BCIP/NBT 堿性磷酸酯酶顯色試劑盒是一種用于免疫組化顯色、Western 等膜顯色和誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞iPS 鑒定等的試劑盒。

BCIP/NBT 是堿性磷酸酯酶的常用底物。在堿性磷酸酯酶的催化下,BCIP 會(huì)被水解產(chǎn)生強(qiáng)反應(yīng)性的產(chǎn)物,該產(chǎn)物會(huì)和NBT 發(fā)生反應(yīng),形成不溶性的深藍(lán)色至藍(lán)紫色的NBT-formazan。

本試劑盒可以用于細(xì)胞或組織的堿性磷酸酯酶顯色包括誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞iPS 的鑒定,也可以用于Western 等結(jié)合有堿性磷酸酯酶的膜的顯色檢測(cè)。同時(shí)也可以用于細(xì)胞或組織內(nèi)源性的堿性磷酸酯酶顯色。

組份規(guī)格:

試劑A:堿性磷酸酯酶顯色緩沖液 100ml

試劑B:BCIP 溶液(300X) 350μl

試劑C:NBT 溶液(150X) 700μl

使用說(shuō)明

1. 對(duì)于組織切片或細(xì)胞樣品或膜,在與堿性磷酸酯酶標(biāo)記的抗體或其它形式的探針孵育后,用適當(dāng)洗滌液洗滌3-5 次,每次3-5 分鐘。對(duì)于檢測(cè)內(nèi)源性堿性磷酸酯酶的組織或細(xì)胞樣品,在適當(dāng)固定后,也用適當(dāng)洗滌液洗滌3-5 次,每次3-5 分鐘。

2. 按照如下比例依次加入各溶液,混勻后即配制成BCIP/NBT 染色工作液,配方如下:試劑A:堿性磷酸酯酶顯色緩沖液 3mL試劑B:BCIP 溶液(300X) 10μL試劑C:NBT 溶液(150X) 20μL染色工作液總體積:3.03mL

3. 后一次洗滌完畢后,去除洗滌液,加入適量BCIP/NBT 染色工作液,確保能充分覆蓋樣品。

4. 室溫避光孵育5-30 分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間(可長(zhǎng)達(dá)24 小時(shí)),直至顯色至預(yù)期深淺。

5. 去除BCIP/NBT 染色工作液,用蒸餾水洗滌1-2 次即可終止顯色反應(yīng)。

6. 對(duì)于組織切片或細(xì)胞樣品,顯色反應(yīng)終止后,如有必要可以用中性紅染色液(neutral red staining solution)染色,以便于觀察。對(duì)于膜,顯色反應(yīng)終止后,可以室溫晾干避光保存。

儲(chǔ)存:4℃,有效期一年。

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);

4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

胱天蛋白11(P11)英文名:P11 C型凝集結(jié)構(gòu)域家族4成員C抗體包裝25mg

胱天蛋白1(P1)英文名:P1 CD226抗體包裝25g

胱硫醚β合(CβS)英文名:CβS CD26抗體包裝5g

骨形成蛋白8B(BMP8B)英文名:BMP8B 免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ/Fc γ RII a抗體包裝5g

骨形成蛋白6(BMP6)英文名:BMP6 緊密連接蛋白20抗體包裝1g

骨形成蛋白1(BMP1)英文名:BMP1 中心體蛋白135抗體包裝5g

骨骼肌特異性受體酪激(MUSK)英文名:MUSK 半胱蛋白蛋白-7抗體包裝100g

骨骼肌慢肌肌鈣蛋白T(TNNT1)英文名:TNNT1 鈣調(diào)節(jié)抗體(鈣調(diào)蛋白/鈣調(diào))包裝10g

骨骼肌快肌肌鈣蛋白I(TNNI2)英文名:TNNI2 1號(hào)染色體開放閱讀框181抗體包裝25g

骨鈣(OC)英文名:OC Ⅰ型補(bǔ)體受體抗體(C3b/C4b受體抗體)包裝25mg

骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPRⅡ)英文名:BMPRⅡ 8型膠原/內(nèi)皮膠原蛋白抗體包裝1g

骨成型蛋白受體1A(BMPR1A)英文名:BMPR1A 結(jié)合轉(zhuǎn)化激活因子CITED1抗體包裝5g

骨成型蛋白7(BMP7)英文名:BMP7 色P450 2C9抗體包裝10MG

骨成型蛋白4(BMP4)英文名:BMP4 色P450 2D6抗體包裝100g

骨成型蛋白2(BMP2)英文名:BMP2 血小板活化因子CTR9抗體包裝25g

特羅伊察棲砂桿菌Arenibacter│troitsensis 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定早老2試劑盒乙?;邹继J;Acetyl-trans

長(zhǎng)柄鏈格孢Alternaria│longipes 質(zhì)量規(guī)格:>98%,合物早老1試劑盒羊藿次II;Icarisid II

鮑希瓦氏菌Shewanella│haliotis 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP32,BR,可用于培養(yǎng)再生胰島衍生1α/胰石蛋白/胰線蛋白試劑盒茵芋;Skimmin
BCIP/NBT堿性磷酸酯酶顯色試劑盒細(xì)孢毛霉 亞磷二異丁酯4-羥基苯酮雙加氧

匍枝根霉(黑根霉) 6-氨基-吡-2-羧甲酯COP9結(jié)構(gòu)光形態(tài)發(fā)生同源物亞基2

Aureimonas frigidaquae N-(3-氨基基)-N-甲基叔丁酯鹽鹽COP9結(jié)構(gòu)光形態(tài)發(fā)生同源物亞基2抗體

光帽鱗傘(滑菇) S-甲基-L-半胱CC趨化因子配體1

茶藨子葡萄座腔 4-溴-3,5-二三氟甲苯RIG-I

釀酒酵母 N,N-雙(2-乙基)叔丁酯柯薩奇病B3

橄欖綠鏈霉 4-(二氟甲氧基)-3-(環(huán)氧基)苯甲DNA甲基轉(zhuǎn)移3A2

白僵 1,1,2,3,3-五烷雌受體γ

冬菇屬 膽固琥珀單酯柯薩奇病

米曲霉 3-(4-溴芐基)-2-丁基-5--4-咪唑甲G_(i;o)蛋白

耐冷冷桿 Nα,Nε-雙(叔丁氧羰基)-L-賴二環(huán)己鹽蛋白聚糖A

普通鏈霉 甲氧基去氧腎上腺鹽鹽蛋白聚糖B

香菇 反式-4'-乙基-[1,1'-聯(lián)環(huán)己烷]-4-酮酪氨基轉(zhuǎn)移

Paucimonas lemoignei 5-(2-甲氧基苯氧基)-[2,2-二嘧啶]-4,6(1H,5H)-二酮谷氨基轉(zhuǎn)移

芽孢桿屬 2-(2-甲氧基苯氧基)二二甲酯補(bǔ)體蛋白1

 


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