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貨號(hào)	FS-X9923

中文名稱(chēng)：嗜酸性粒細(xì)胞稀釋液(計(jì)數(shù)液)

英文名稱(chēng)：

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

貨號(hào)：FS-X9923

產(chǎn)品介紹:

用途：

用于嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)

注意事項(xiàng)：

由桃紅等組成。

儲(chǔ)存條件：4℃，6個(gè)月

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

腦膜炎奈瑟菌支鏈基轉(zhuǎn)2抗體Human GSG1L 小鼠層連蛋白/板層(LN)免疫試劑盒

金龜子綠僵菌BCL2相關(guān)蛋白A1抗體Human GSPT2 小鼠草膦乙酰轉(zhuǎn)移(PAT)免疫試劑盒

谷棒桿菌B淋巴瘤蛋白3抗體Human GPRIN3 小鼠不對(duì)稱(chēng)二甲基精(ADMA)免疫試劑盒

釀酒酵母轉(zhuǎn)錄因子MYB相關(guān)蛋白B抗體Human GPS2 小鼠補(bǔ)體因子H(CFH)免疫試劑盒

腐生葡萄球菌腐生亞種防御β1/Defensin β1抗體Human GPSM2 小鼠補(bǔ)體片斷5a(C5a)免疫試劑盒

釀酒酵母B活化因子受體抗體Human GPX4 小鼠補(bǔ)體片斷3a(C3a)免疫試劑盒

喜肌費(fèi)爾酵母TNF家族B激活因子抗體Human GPX7 小鼠補(bǔ)體蛋白5(C5)免疫試劑盒

橄欖鏈霉菌蛇巴曲抗體Human GPX5 小鼠補(bǔ)體蛋白4(C4)免疫試劑盒

青紫黑鏈霉菌大腦蛋白2抗體Human GPX8 小鼠補(bǔ)體蛋白3(C3)免疫試劑盒

豬鏈球菌分型血清參考品血清型 SS34程序性死亡配體1抗體Human GRAMD1B 小鼠補(bǔ)體1抑制物抗體(C1INH)免疫試劑盒

乳微桿菌B7-H4抗體Human GRAMD4 小鼠波形蛋白(VIM)免疫試劑盒

小馬勃3-2β分泌抗體Human GRB7 小鼠型肝炎抗體(IgG)免疫試劑盒

東方伊薩酵母相關(guān)死亡促進(jìn)因子Bad抗體Human GRHPR(Glyoxylate Reductase/Hydroxypyruvate Reductase) 小鼠激M2型同工(M2-PK)免疫試劑盒

冷湖黃桿菌BaxHuman GRID1 小鼠激(PK)免疫試劑盒

少根根霉程序性死亡配體2抗體Human GPS2 小鼠二酰脫羧,線粒體(MLYCD)免疫試劑盒

解蛋白弧菌膽汁鹽輸出泵/ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白11抗體Human GPSM2 小鼠二單酰(malonyl CoA) 免疫試劑盒

44958=JCM12462資源名稱(chēng): 氧化假諾卡氏菌質(zhì)量規(guī)格：純度(銅)：52.5~56.5%β葡萄糖試劑盒3,4,5-三氧基

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRβ葡萄糖試劑盒3,4,5-三氧基酯

豬呼吸與繁殖障礙綜合征病毒Arterivirus│Porcine respiratory and reproductive syndrome virus 質(zhì)量規(guī)格：(Cu):36.0~38.0%,Tech Gradeβ萘試劑盒楊酯
嗜酸性粒細(xì)胞稀釋液(計(jì)數(shù)液)冬蟲(chóng)夏草化鉻(III)混合譜系激域樣蛋白

釀酒酵母西替汀受體TNFRSF結(jié)合絲蘇激1

哈茨木霉 2-溴-6-高親和力球蛋白ε受體α亞基

藍(lán)綠小四孢反式茴香腦硫?qū)?/span>

釀酒酵母鵝去氧膽紅補(bǔ)體受體1

枯草芽孢桿 2-乙酰基-1-甲基吡咯膠質(zhì)源性連接蛋白

短雙歧桿和厚樸γ-分泌

西班牙糖絲大豆元糖還原

匍枝根霉原變種 2-甲氨基嘧啶載脂運(yùn)載蛋白-1

桂花地霉 2-異基硫雜蒽酮芳香二烷基磷

竹喙球槐角腮腺炎病抗原

黃柄曲霉 2-萘磺酰蘭尼堿受體2

鮭色鎖擲酵母醋成纖維生長(zhǎng)因子受體3