作為生物大分子的蛋白質(zhì),是一種長鏈高分子化合物,不僅分子量大,而且在溶液中的擴散系數(shù)小、黏度大、易受外界溫度、酸度、有機溶劑的影響而并引起結(jié)構(gòu)變化。這增加了蛋白質(zhì)分離、分析的困難。
蛋白質(zhì)在物理、化學及功能上的差異為蛋白質(zhì)的分離檢測提供了基礎(chǔ)。用高效液相色譜法來分析蛋白質(zhì)是一種近年來發(fā)展較快的新型分析方法。Bietz在1983-1984年就對用反相(RP)和尺寸排阻(SE)高效液相色譜來分離小麥蛋白質(zhì)和玉米蛋白質(zhì)的實驗進行報導。由于高效液相色譜柱的改進和HPLC技術(shù)的迅速發(fā)展,HPLC在蛋白質(zhì)分析研究中越趨成熟。
HPLC分析蛋白質(zhì)不僅簡便快捷,而且選擇性好,分離效率高,檢測靈敏度高。HPLC的分離模式與檢測辦法多種多樣,根據(jù)蛋白質(zhì)的大小、形狀、電荷、疏水性、功能等特性,以及蛋白質(zhì)的來源、實驗要求等,可以采用不同的色譜柱和檢測器來分離目標蛋白。根據(jù)分離機理,蛋白質(zhì)的HPLC法可以分成尺寸排阻色譜(SEC),反相高效液相色譜(RP-HPLC)和凝膠滲透色譜(GPC)三大類。SEC 和RP-HPLC 兩種色譜分離模式構(gòu)成了蛋白質(zhì)分析的主流。
HPLC法分離蛋白質(zhì)的不同模式,可對其他領(lǐng)域蛋白質(zhì)的研究提供強有力的手段。同時這些色譜柱和檢測器都存在各自的側(cè)重點,很難找到一種符合全部要求的理想的檢測器和色譜柱,所以利用HPLC法分離檢測蛋白質(zhì)的研究還會繼續(xù),以發(fā)現(xiàn)更方便、快速、靈敏度更高,通用性更好的HPLC分析方法,推動蛋白質(zhì)化學的發(fā)展。
隨著HPLC聯(lián)用技術(shù)的應(yīng)用更加廣泛,無疑將進一步促進我國儀器的發(fā)展,對我國生命科學研究的發(fā)展和環(huán)境監(jiān)測都有重要意義。
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