液相色譜以操作簡單、分析周期短、分析范圍廣、定量分析結(jié)果準確、分析檢出限低等優(yōu)勢，在食品添加劑、藥物成分分析等多領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。液相色譜儀是一種檢測儀器，精密快速，為了能夠長久持續(xù)有效地使用，這就要求操作人員需嚴格正確使用儀器，定期進行科學(xué)有效地維護。

儀器主要組成部分

高效液相色譜儀主要是由輸液系統(tǒng)、進樣器、色譜柱、檢測器和色譜軟件數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。

使用過程中注意事項

1、儲液瓶存放符合要求的流動相（HPLC級，溶劑粘度?。⑦M行過濾、脫氣處理。

目的是防止固體顆粒損傷儀器或柱頭;未經(jīng)過濾的溶劑或者溶劑瓶中生長微生物，都會降低溶劑入口過濾頭的壽命，并影響泵的性能，一般要求兩天過濾一次。

注意：過濾水相或有機相應(yīng)該選用不同的濾膜。

2、緩沖液的使用

使用前必須過濾，使用后一定要對柱子進行清洗，以免造成腐蝕、磨損及阻塞:首先用5～10％的甲醇水溶液沖洗10-30 min（0.5-1 ml/min），再用甲醇沖洗30 min(0.1-0.5 ml/min)。

注意沖洗次序，不能直接用有機溶劑沖洗。

3、進行樣品前處理

A、使用流動相溶解樣品減少溶劑峰，尤其是組分峰靠近溶劑峰時尤為重要。保證樣品在流動相中的溶解度，避免樣品在系統(tǒng)中尤其在柱中產(chǎn)生沉淀。

B、進樣前使用0.45um 的膜進行過濾，如果樣品很臟，要使用0.2um的膜進行過濾。C、對于含有復(fù)雜基質(zhì)的樣品，過前處理小柱后再進樣。

日常維護

1、保持儀器的環(huán)境（經(jīng)常清潔儀器，尤其是灰塵）

系統(tǒng)中不要長期保存水和鹽，長時間不用時應(yīng)將儀器所有部分全部更換為70％以上的甲醇，避免細菌的滋生及鹽的析出。

2、吸濾頭堵塞

表現(xiàn)為管路中不斷有氣泡生成，措施：用異丙醇（或5％稀硝酸），超聲波清洗，再用蒸餾水清洗。

3.泵的維護

含有緩沖鹽的流動相不能保留在泵內(nèi)，尤其是停泵過夜或更長時間。分析結(jié)束后一定要先用純水沖洗泵（沖洗過程中需卸下色譜柱），然后再換合適溶劑沖洗（一般反相鍵合固定相，可以是甲醇或者甲醇和水溶液）。

4、定期清洗單向閥：將單向閥卸下，一般先用純凈水超聲10分鐘，然后用異丙醇超聲10分鐘。定期清洗吸濾頭：將吸濾頭卸下，用異丙醇超聲10分鐘。

5.定期沖洗檢測池：把色譜柱卸下，在流速1.0ml/min的狀態(tài)下先用純凈水沖洗30分鐘，然后再用30%磷酸（色譜級）沖洗30分鐘左右，再用超純水沖洗至流出液為中性，最后用甲醇沖洗，待用。

6、色譜柱的日常保養(yǎng)

A、購買新柱后一定要仔細閱讀說明書，確認柱的使用條件以及清洗再生步驟，按照說明書條件測試色譜柱柱效，記錄使用壓力。B、定期檢測柱壓和柱效。C、不同流動相之間轉(zhuǎn)換時應(yīng)注意溶劑的互溶性。D、確認樣品不會在流動相中析出或帶有固體不溶物，請使用0.45um或0.2um的一次性濾膜過濾樣品，或者進行前處理。E、為了延長色譜柱使用壽命，請使用保護柱。F、定期用合適的溶劑清洗或再生色譜柱。G、長期不用時，清洗干凈后，使用柱子說明書中指明的溶劑保存。柱子要從儀器上卸下并用堵頭密封后保存。H、定期用合適的流動相清洗保存的柱子，避免干涸。

常見色譜問題

1、壓力異常（偏高、偏低以及波動）

壓力是液相色譜中最重要的指標，要經(jīng)常關(guān)注壓力的變化。不同溶劑即使在相同流速和溫度的情況下壓力也是不同的。建議操作者記下儀器正常狀態(tài)時，在一定條件下（流速、溫度）的壓力顯示值，每次做樣分析時進行監(jiān)測。

A、壓力偏高

首先要確認是色譜柱堵塞還是系統(tǒng)堵塞色譜柱堵時：確認可能造成堵塞的樣品的性質(zhì)，相應(yīng)選擇合適的清洗溶劑。系統(tǒng)堵塞時：首先應(yīng)確認是哪一部份堵塞，依據(jù)情況排除。

B、壓力偏低

如果壓力為零：（1）泵頭中沒有液體，而是充滿了氣泡；（2）單向閥堵死；（3）柱塞桿折斷；（4）壓力傳感器損壞(流動相流動正常，但無壓力)。如果有壓力但是壓力比正常時低：（1）漏液；（2）單向閥堵塞。

C、壓力在短時間內(nèi)劇烈波動

泵頭中有氣泡、單向閥臟、柱塞密封圈漏液。

2、漏液

經(jīng)常漏液的部件：（1）泵（柱塞密封圈、排液閥）；（2）手動進樣器（轉(zhuǎn)子密封圈磨損）；（3）檢測器（流通池窗口，墊片損壞，透鏡破碎）；（4）接頭處漏液（接頭松動，接頭臟，接頭磨損，部件不匹配）

3、保留時間漂移

吸濾頭臟、泵輸液不正常（壓力波動、氣泡等）、流動相組分變化、流動相緩沖能力不夠、色譜柱平衡時間不夠、柱溫的變化、柱子問題等。

4、基線問題（漂移、噪聲）

A、噪音大

（1）流動相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成

（2）有地方漏液

（3）流動相、泵、檢測器流通池內(nèi)有氣泡

（4）流動相各溶劑不相溶或混和不均勻

（5）檢測池能量不足

（6）流通池被污染

（7）溫度影響（檢測器和柱溫差別太大）

（8）其他電子設(shè)備的影響

B、基線漂移

（1）流動相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成

（2）流動相不均勻(脫氣，使用純度更高的溶劑)

（3）溫度波動

（4）柱子平衡時間不夠

（5）流通池被污染或有氣泡

（6）流通池窗口破裂

5、峰形異常

A、峰形問題

（1）死體積太大

（2）色譜柱問題（柱子被污染或堵塞、色譜柱塌陷）

（3）流動相緩沖不足或不合適

（4）樣品溶劑選擇不當，與流動相之間極性差異太大

（5）樣品過載（濃度或體積）

（6）柱溫過低

B、出現(xiàn)鬼峰

（1）流動相被污染

（2）進樣閥殘余峰

（3）樣品中未知物

（4）色譜柱中的污染物