如甲醇，乙腈之間的更換：

（1）將對應(yīng)的沉子濾杯放入裝有新流動相的燒杯中，輕輕晃動以置換沉子濾杯中殘留的舊流動相；

（2）將沉子濾杯放入新流動相的溶劑瓶中。

B. 異類流動相更換

如甲醇，乙腈更換為含鹽流動相：

（1）將對應(yīng)的沉子濾杯放入裝有過渡流動相（除了不含鹽，配置方法同含鹽流動相）的燒杯中；

（2）按照開機沖洗系統(tǒng)中含鹽流動相沖洗系統(tǒng)步驟操作。

C. 正反相互換

反相轉(zhuǎn)正相：

（1）先用甲醇或乙腈將反相系統(tǒng)和色譜柱沖洗干凈，卸下反相色譜柱；

（2）不接色譜柱，連接好管路，用異丙醇沖洗系統(tǒng)30min（1ml/min）；

（3）換正己烷沖洗系統(tǒng)30min；

（4）接好正相色譜柱，用正己烷沖洗至系統(tǒng)平衡。

正相轉(zhuǎn)反相：

按上面反方向步驟操作。

2.流動相溶劑使用的注意事項

（1）流動相溶劑應(yīng)選擇HPLC 的溶劑或依此為標準的溶劑。流動相使用前用0.45μm濾膜過濾、脫氣，清除微粒和灰塵。在送液泵內(nèi)，為了防止雜物（固體）進入流路，裝有吸濾器，但網(wǎng)孔徑為10μm，比此更小的顆粒仍然可通過，這會導(dǎo)致流路和柱子堵塞和污染。為此，建議常用0.45μm 濾膜過濾。流動相溶劑須經(jīng)脫氣，如不脫氣，在溶劑混合時，或壓力溫度變化時容易產(chǎn)生大量氣泡，會導(dǎo)致泵誤動作和輸液不暢，檢測器產(chǎn)生噪聲信號等。

（2）流動相恢復(fù)到室溫后使用。流動相溫度與室溫相差時，流動相在恢復(fù)到室溫前，基線水平很難穩(wěn)定，特別是發(fā)生漂移，也容易產(chǎn)生氣泡等現(xiàn)象。水與有機溶劑混合時，混合液變化大，往往會與室溫相差很大，務(wù)必注意。

（3）做HPLC流動相的試劑應(yīng)用HPLC級的、水應(yīng)用二次蒸餾水，水相流動相需經(jīng)常更換，防止長菌變質(zhì)。使用去離子水、針劑水、純凈水（炊用）并不合適、尤其是做梯度洗脫時，水中的不純物會成為鬼峰，從而干擾分析結(jié)果。

（4）流動相的pH值過高或過低，流動相使用純水，使用高濃度磷酸鹽緩沖溶液，使用離子對試劑等，均可能造成色譜柱填料被化學(xué)破壞，這種對色譜柱固定相及鍵合相的破壞通常是不可修復(fù)的。

（5）用緩沖鹽做流動相時，在使用前和使用后都要用水清洗流路，禁止將緩沖溶液留在流路中靜置過夜或更長時間。

（6）若需要使用含鹽的流動相，使用前請務(wù)濾。并且使用該含鹽流動相前，色譜柱需先用低比例有機相（有機相含量應(yīng)不低于10%）的溶液沖洗，以免緩沖鹽析出。流動相若為蒸餾水或含鹽的緩沖液，建議現(xiàn)用現(xiàn)配，以免流動相因滋生微生物而造成柱填料的污染。

（7）進行梯度實驗時要注意梯度變化過程中流動相的互溶性，避免因流動相不互溶而導(dǎo)致的緩沖鹽析出問題。反相系統(tǒng)更換正相系統(tǒng)或正相系統(tǒng)更換反相系統(tǒng)時，用異丙醇置換系統(tǒng)內(nèi)的儲存流動相后再接柱子。

（8）在更換兩種互不相溶的流動相時，中間要用異丙醇溶液清洗過渡。例如：先用甲醇水做流動相，然后在用正己烷做流動相時，一定要先用異丙醇溶液沖洗甲醇水，然后用正己烷沖洗異丙醇，反之也是一樣。在更換流動相時還要考慮色譜柱是否更換。

（9）儀器在短期（兩三天）不用時，流路中可以是甲醇水。儀器在長期不用時，流路中應(yīng)用甲醇。

（10）對于UV等檢測器用于高靈敏度檢測時，要使用UV吸收性小的HPLC的溶劑作為流動相溶劑，如甲醇、乙腈等。

（11）當流動相溶劑為乙腈時，流速為1ml/min 泵的正常壓力5～7Mpa之間，如果壓力逐漸降低，基線也出現(xiàn)異常。這是由于乙氰的粘性大，導(dǎo)致泵的流速降低?？蛇m當提高流速使泵的壓力恢復(fù)正常即可。

（12） 流動相含有濃硫酸、濃硝酸、二、二氯甲烷、氯仿、丙酮、四氯呋南、二甲化砜等溶劑，會對流路中的PEEK樹脂管路強度變成差、PEEK樹脂管容易破裂使溶劑外濺。流動相含有鹵素離子的溶劑，如KCI、NaCI、NH4CI等。對流路中的不銹鋼材料有腐蝕作用，以上的溶劑須盡量避免使用。非用不可時，分析完了后，應(yīng)立刻用蒸餾水把全流路清洗干凈。

（13）用于檢定梯度等性能時，短時間使用在0.5%以下的低濃度丙酮水溶液是沒有問題的。

（14）注意：稀硝酸與甲醇不能混合，否則有可能會引起爆炸。

3.液相色譜流動相的貯存

流動相一般貯存于玻璃、聚四氟乙烯或不銹鋼容器內(nèi)，不能貯存在塑料容器中。因許多有機溶劑如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑劑，導(dǎo)致溶劑受污染。這種被污染的溶劑如用于HPLC系統(tǒng)，可能造成柱效降低。貯存容器一定要蓋嚴，防止溶劑揮發(fā)引起組成變化，也防止氧和二氧化碳溶入流動相。磷酸鹽、乙酸鹽緩沖液很易長霉，應(yīng)盡量新鮮配制使用，不要貯存。如確需貯存，可在冰箱內(nèi)冷藏，并在3天內(nèi)使用，用前應(yīng)重新濾過。容器應(yīng)定期清洗，特別是盛水、緩沖液和混合溶液的瓶子，以除去底部的雜質(zhì)沉淀和可能生長的微生物。因甲醇有防腐作用，所以盛甲醇的瓶子無此現(xiàn)象。