一、液相試劑要求

試劑如甲醇，乙腈必須為色譜級純，其他試劑也盡量使用色譜級純，試劑標簽上都會標有色譜級或HPLC等字樣。水為超純水或者直接購買質(zhì)量有保證的純凈水。

二、流動相配置注意事項

一般來說，溶劑的混合按體積比（V/V）或重量比（W/W）進行。溶液的體積因溫度而變化，所以按重量比混合配置流動相，樣品測定的重復性較好，但是操作繁瑣，通常多為體積混合。

體積混合有三種方式，例如50%乙腈水溶液：

方式（1）：可以用量筒量取乙腈500ml，再量取水500ml，兩種液體在瓶內(nèi)充分搖晃混合。

方式（2）：可以先取500ml乙腈到1L容量瓶中然后用水定容。

方式（3）：可以先取500ml水到1L容量瓶中然后用乙腈定容。

這三種方式配置得到的流動相組成都是不同的，即使不考慮其他方面因素，保留時間也不會相同。一般情況推薦使用方式（1）來配置流動相。

三、含緩沖鹽流動相的配制需注意的問題

配置緩沖鹽使用的鹽試劑也盡量使用色譜級純，稱樣要精準，為了達到要求，選用合適量程的天平且每天使用前對天平校正。按要求配置好以后必須通過0.45μm或0.22μm濾膜過濾并超聲脫氣20min以上。

注意：緩沖鹽要臨用新配。

四、 調(diào)節(jié)流動相pH值

采用反相色譜法分離弱酸（3≤pKa≤7）或弱堿（7≤pKa≤8）樣品時，通過調(diào)節(jié)流動相的pH值，以抑制樣品組分的解離，增加組分在固定相上的保留，并改善峰形的技術稱為反相離子抑制技術。

（1）對于弱酸，流動相的pH值越小，組分的k值越大，當pH值遠遠小于弱酸的pKa值時，弱酸主要以分子形式存在；分析弱酸樣品時，通常在流動相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液。

（2）對于弱堿，情況相反。分析弱堿樣品時，通常在流動相中加入少量弱堿，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。

流動相中加入有機胺可以減弱堿性溶質(zhì)與殘余硅醇基的強相互作用，減輕或消除峰拖尾現(xiàn)象。所以在這種情況下有機胺（如三乙胺）又稱為減尾劑或除尾劑。

注意：PH的調(diào)節(jié)不可超出色譜柱的PH耐受范圍。