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上海百蕊生物科技有限公司
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*親和素酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(BAS-ELISA)

時(shí)間:2012-2-7閱讀:3235
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 *親和素(又稱抗*)系統(tǒng)(biotinavidin system,BAS)標(biāo)記抗體的技術(shù)是20世紀(jì)70年代后期發(fā)展起來的一種新的免疫檢測方法。由于親和素與*間的親和力*,結(jié)合迅速,且極其穩(wěn)定,*標(biāo)記抗體和酶的標(biāo)記率高,又不影響蛋白的活性,使BAS標(biāo)記技術(shù)比常規(guī)酶聯(lián)免疫、放射免疫及熒光免疫技術(shù)有著更高的靈敏度,為微量抗原、抗體的檢測開辟了新的途徑。目前*和親和素(近年來,在BAS檢測中多用鏈霉親和素“streptavidin,SA”,它是鏈霉菌培養(yǎng)過程中的分泌物,完整的鏈霉親和素和從卵白中提取的親和素一樣,也由4條相同的肽鏈組成。因鏈霉親和素在檢測應(yīng)用中發(fā)生的非特異性結(jié)合遠(yuǎn)較親和素低,因此日漸受重視,已有取代親和素之勢),

各種抗體或酶的標(biāo)記物在國內(nèi)已有商品供應(yīng),使用方便。BASELISA具有的特點(diǎn):
①對于所有的抗原抗體系統(tǒng),包括免疫細(xì)胞化學(xué)、ELISA、免疫印跡法等都適用,應(yīng)用范圍極廣;
②BAS在溫和條件下可與各類生物大分子如蛋白質(zhì)、脂多糖等結(jié)合,并且這種結(jié)合對原生物大分子的生物活性無影響;
③每個(gè)親和素分子可與4個(gè)*分子結(jié)合,所以可以偶合更多連接*的酶分子,從而大大提高了靈敏度;
④*和親和素間親和力強(qiáng),故二者一旦結(jié)合,就極為穩(wěn)定,不受在ELISA方法中的保溫及多次洗滌影響,而且這種結(jié)合反應(yīng)時(shí)間比抗原抗體反應(yīng)所需時(shí)間短;
⑤結(jié)果專一性強(qiáng),非特異性顯色或染色背景極低;
⑥*抗體稀釋度高,可節(jié)約抗體。

原理
*或親和素與抗體分子或標(biāo)記物結(jié)合后,既不影響前者的親和力,也不改變后者的特性。親和素分子的4個(gè)活性部位并非都和連接在抗體分子上的*殘基結(jié)合,剩下的游離部位尚可作為另一種*標(biāo)記蛋白質(zhì)的受體。這些特點(diǎn)就是BAS免疫標(biāo)記技術(shù)的基礎(chǔ)和原理。
BAS基本檢測方法可分為兩大類,一類以游離親和素居中,分別連接*化大分子反應(yīng)體系和標(biāo)記*,稱為BAB法或橋聯(lián)親和素*法(bridged avidin biotin technique,BRAB),其改良法稱為(avidinbiotin complex,ABC)法。另一類以標(biāo)記親和素連接*化大分子反應(yīng)體系,稱為BA法或標(biāo)記

親和素和*法(LAB)。現(xiàn)分別介紹如下:
1 BA法亦稱LBA法。系將特異性抗體*化,將酶分子標(biāo)記在親和素分子上,*化抗體與被檢抗原結(jié)合后,再借BAS的高度親和力將酶分子聯(lián)結(jié)到抗原分子上,經(jīng)酶促反應(yīng)即可檢出抗原。
2 BAB法亦稱BRAB法。系將特異性抗體*化,將酶分子標(biāo)在*上,然后以游離親和素橋聯(lián)物,使被檢抗原、*化抗體和酶標(biāo)*聯(lián)成一體。
3 ABC法原理與BAB法基本相同,只是親和素和酶標(biāo)*需要先按一定比例形成ABC復(fù)合物,這種網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)結(jié)合了大量的酶分子,當(dāng)親和素尚未被酶標(biāo)*飽和時(shí),*化抗體即可與之結(jié)合。BASELISA的三種基本檢測法。

上述方法中,如將第二抗體*化,即為間接法,見表341。由于間接法增加了一級抗原抗體反應(yīng),因而比直接法更敏感,應(yīng)用范圍更廣。近年來許多學(xué)者對上述基本方法進(jìn)行了改良,有人用親和素抗體或A蛋白作橋聯(lián)物。另外還發(fā)展了BAELISA競爭法和抑制法等。

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