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上海博研生物工程研究中心
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斑馬魚睪酮(T)Elisa試劑盒作用分析

時間:2013/7/4閱讀:462
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斑馬魚睪酮(T)實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中斑馬魚睪酮(T)水平。用純化的斑馬魚睪酮(T)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入睪酮(T),再與HRP標記的睪酮(T)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的睪酮(T)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中斑馬魚睪酮(T)濃度。

標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

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斑馬魚睪酮(T)計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。

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