硒的測定 2 3 二氨基萘熒光法 
l 范圍
1.1 主題內(nèi)容 ，水樣經(jīng)混合酸液消解 ，再經(jīng)鹽酸還原 然后測定硒濃度， 包括無機的六價和四價硒 以及低價硒(系指四價以下的無機和有機硒)。
1.2 適用范圍，  本方法適用于各種清潔水 ，生活污水及某些工業(yè)廢水(見附錄 A)，  水中一般常見的陰 陽離子不干擾硒的測定 銅 鐵 鉬等重金屬離子及大量氧化物對 ，測定硒有干擾 可用 EDTA 及鹽酸羥胺消除， 在本法測定條件下 ，硒含量為 0.05ìg 時 30ìg砷 鈷 鉻 5ìg 鎘 20ìg 鎳 27ìg 鈹 35ìg 銅 40ìg 錳 50ìg 鉛 鋅 100ìg 鐵 釩等 ，不干擾 本法檢出量為 0.005ìg 硒 取 20mL 水樣測定 ，硒的檢出濃度為 0.25ìg/L。
在線濃硝酸儀

2 原理
 2 ，3 二氨基萘在 pH1.5~2.0 溶液中 選擇性地與四價硒離子反應生成 4 ，5 苯并 硒腦(4 ，5 beozopiaselenol)綠色熒光物質(zhì) 被環(huán)己烷萃取 所產(chǎn)生的熒光強度與四價硒含量成正比 。水樣經(jīng)硝酸 ，高氯酸混合酸液消解 ，將四價以下的無機和有機硒氧化為四價硒 再經(jīng)鹽酸消解將六價硒還原為四價硒 然后測定總硒含量 。
3 試劑            在線濃硝酸儀
 除另有說明外， 分析中使用蒸餾水及去離子水及的分析純試劑 。
3.1 蒸餾水及去離子水 ，電阻率在 500000 cm(25 )以上。
3.2 環(huán)己烷(C6H12)， 不得含熒光雜質(zhì) ,不純時需重蒸餾 收集 80~81 餾分 使用過的環(huán)己烷可重蒸后再用.。
3.3 硝酸(HNO3)， 密度(ñ20)為 1.4g/mL 優(yōu)級純 。
3.4 高氯酸HClO4) ，密度(ñ20)為 1.68g/mL 優(yōu)級純 。
3.5 硝酸 ，高氯酸混合酸液 1+1(V/V) 。
3.6 鹽酸(HCl)， 密度(ñ20)為 1.18g/mL 優(yōu)級純 。
3.7 鹽酸溶液 1+4(V/V)。
3.8 鹽酸溶液 ，約 0.1mol/L 將 8.4mL 鹽酸(3.6) 用水(3.1)稀釋至 1000mL .
3.9 氨水(NH3+H2O) ，密度(ñ20)為 0.9g/mL 優(yōu)級純 。
3.10 氨水溶液 1+1(V/V) 。 
3.11 甲酚紅溶液 ，0.2g/L 將 20mg 甲酚紅(C22H18O5S)溶于少量水中加 1 滴氨水(3.9) 使全溶解 加水(3.1)稀釋至 100mL。
3.12 混合試劑 ，將 10g Na2 EDTA 溶于少量水中，加熱溶解 冷卻后加入 10g 鹽酸羥胺(NH2OH HCl)及 10mL 甲酚紅溶液(3.11)， 用水稀釋至 200mL 貯于冰箱內(nèi) 臨用前將此液，用水稀釋 10 倍 。
3.13 精密 pH ，試紙 pH0.5~5.03.14 2 3 二氨基萘溶液 1g/L， (此溶液需在暗室中配制) 將 100mg 2 3 二氨基萘[C10H6(NH2)2 簡稱 DAN]于 250mL 磨口錐形瓶(4.1)中 加入， 0.1mol/L 鹽酸(3.8)100mL 振搖至全部溶解后 加入 20mL 環(huán)己烷(3.2)繼續(xù)振搖 5min 若 DAN 試劑不純時， 環(huán)已烷相有大量褐色懸浮物， 棄去 水相再加環(huán)己烷反復萃取洗至環(huán)己烷相無色透明時 移入底部塞有玻璃棉(或脫脂棉)的分液漏斗(4.2)中 ，靜置分層后將水相放回原錐形瓶內(nèi)， 再用環(huán)已烷(3.2)同上， 操作萃取 3 次 將此純化的溶液貯于棕色瓶中 加一層約 1cm厚的環(huán)已烷(3.2)以隔絕空氣2置冰箱內(nèi)保存， 用前再以環(huán)己烷(3.2)萃取一次，經(jīng)常使用每月配制一次為宜 ，不經(jīng)常使用可保存一年。
3.15 硒標準貯備溶液 100mg/L 準確稱取， 0.1000g光譜純元素硒(Se)溶于少量硝酸(3.3)中加入 2mL 高氯酸(3.4) 在沸水浴上加熱除去硝酸 稍冷后加入少量水和 8.4mL 鹽酸(3.6) 繼續(xù)加熱 2min 然后轉(zhuǎn)移至 1000mL 容量瓶 用水稀釋至標線并混勻， 本溶液在冰箱內(nèi)可貯存一年， 每毫升標準溶液含 100ìg 硒。
3.16 硒標準溶液 ，5.00mg/L 取 5.00mL 硒標準貯備溶液(3.15)于 100mL ，容量瓶內(nèi) 用 0.1mol/L鹽酸溶液(3.8)稀釋至標線并混勻 于冰箱內(nèi)貯存 每毫升溶液含 5.00ìg 硒。
3.17 硒標準使用溶液 ，5.00ìg/L 取 1.00mL 硒標準溶液(3.16)置 100mL 容量瓶內(nèi)， 用 0.1mol/L鹽酸溶液(3.8)稀釋至標線并混勻 于冰箱內(nèi)貯存 每月配制 每毫升標準溶液含 0.050ìg 硒。
4 儀器
本法使用的玻璃器皿 均須以硝酸(1+1)浸泡 4h 以上， 用自來水及水(3.1)洗凈 ，本法用過的玻璃器皿 以自來水沖洗后 于 0.5 洗衣粉溶液中浸泡 2h 以上， 用自來水及水(3.1)洗凈 ，常用實驗室設備和以下儀器。
4.1 具標準磨口塞錐形瓶 250mL 及 100mL 。在線濃硝酸儀
4.2 分液漏斗， 250mL 及 25mL 活塞上不得涂油 若不易轉(zhuǎn)動時 可加一點水(3.1)潤濕即可 。
4.3 具塞比色管 5mL。
4.4 電熱板 。
4.5 水浴鍋。
4.6 熒光分光光度計或熒光光度計 。
5 采樣與樣品
5.1 采樣，水樣采集時必須使用經(jīng)硝酸(1+1)浸泡 ，4h 以上 然后用大量自來水和水(3.1)沖洗干凈的玻璃瓶或塑料瓶 。
5.2 樣品 ，采樣后不能立即進行測定時， 一般天然水及飲用水可于室內(nèi)陰涼處保存， 工業(yè)廢水 ，及時分折或貯于冰箱內(nèi)，勿加酸保存(注)。
 注 天然水及飲用水中主要含有六價或四價硒 水樣加與不加酸保存均影響不大; 但工業(yè)廢水成分復雜 含有各種價態(tài)硒， 有的水樣中硒以負二價的為主 若加酸保存時可生成硒化氫氣體逸散， 使總硒含量損失很大。
6 操作步驟
6.1 試樣，將樣品(5.2)搖勻后立即取 20mL 或適量 按步驟(6.2)進行測定。
6.2 空白試驗，用水(3.1)代替試樣， 加入試劑的量均與測定試樣時所用的試劑量相同 ，按 6.4.1~6.4.3 測定步驟進行空白試驗，  當測定試樣中硒濃度接近檢出限濃度時， 必須控制空白試驗的熒光強度應盡可能低 其 ，平行管的熒光強度值之差不應超過平均值的 5 否則應將 DAN 試劑(3.14)用之前用環(huán)己烷(3.2)多提純幾次 所用器皿均需重新洗凈 。
6.3 校準曲線 ，取 8 個 100mL 錐形瓶(4.1) 分別加入硒標準溶液(3.17)0.0 0.1 0.3 0.5 0.7 1.0 1.5及 2.0mL 加水(3.1)至與試樣相同體積 然后按照測定步驟(6.4.1~6.4.3)進行操作 分別以測定的各熒光強度減去空白試驗(零濃度)的熒光強度后 與對應的硒含量繪制校準曲線36.4 測定6.4.1 消解 將適量試樣(6.1) 其含硒不超過 0.1ìg 放入錐形瓶(4.1)中 小心地加入 2.5mL 硝酸 高氯酸(3.5) 混勻后于電熱板上加熱至瓶內(nèi)產(chǎn)生濃白煙 立即取下 稍冷后加入 2.5mL 鹽酸溶液(3.7) 繼續(xù)加熱至再產(chǎn)生濃白煙 立即取下放冷 注 樣品以硝酸 高氯酸消解不時雜質(zhì)熒光高 若消解時間過長硒損失很大 所以消解快到終點時 需要注意觀察濃厚白煙的變化 不要過多搖動瓶 當瓶內(nèi)濃白煙分層滾動時 應立即取下6.4.2 熒光物質(zhì)的形成及萃取 向消解的溶液中加入 10mL 混合試劑(3.12) 溶液呈桃紅色 用氨水(3.10)調(diào)節(jié)至淡澄色(pH1.5~2.0) 放冷 注 硒與 2 3 二氨基萘必須在酸性格液中反應 pH 值以 1.5~2.0 為 過低時溶液易乳化 太高時測定結果偏高 甲酚紅指示劑有 pH2~3 及 7.2~8.8 兩個變色范圍 前者是由桃紅色變?yōu)辄S色 后者是由黃色變成桃紅(微帶藍)色 要注意 不可混淆 必要時可用精密試紙 pH0.5~5.0(3.13)檢查 確保溶液的 pH值為 1.5~2.0 以下步驟需在暗室內(nèi)黃色燈光下操作 將 2.0mL DAN 溶液(3.14)加入上述各瓶中 混勻置沸水浴中加熱 5min(自放入水浴鍋中算起) 取出以冷水冷卻后準確加入環(huán)已烷(3.2)4.0mL萃取 2min 然后將全部溶液移入 25mL 分液漏斗(4.2)中 待分層后放掉水相 將環(huán)已烷相由分液漏斗上口傾入具塞比色管(4.3)中 蓋嚴待測6.4.3 熒光測定 用熒光分光光度計 激發(fā)光波長為 376nm 發(fā)射光波長為 520nm 或用熒光光度計 選擇適宜濾片 1 測定熒光強度 以測定試樣的熒光強度減去空白試驗(6.2)的熒光強度 從校準曲線上查得硒量 注 1 不同型號的熒光光度計 所具有的濾片不同 需根據(jù)使用的儀器 進行選擇適宜的濾片 例如用國產(chǎn) 930 型熒光光度計可選擇激發(fā)光濾片為 330nm 熒光濾片為 510nm(截止型)和 530nm(帶通型)組合濾片.
7 結果計算 硒含量        在線濃硝酸儀
c (ìg/L)按下式計算 ，c m/V 1000 式中 m 從校準曲線上查得樣中硒含量 ìg V ，測定用試樣體積 mL 結果以兩位小數(shù)表示。
 8 精密度和準確度
  六個實驗室測定含硒 9.04ìg/L 的統(tǒng)一樣品， 含其他元素濃度(ìg/L)為 鋁(84.8) 砷(22.4)鈹(23.7) 鎘(7.4) 鉻(5.8) 鈷(34.4) 銅(7.2) 鐵(17.1) 汞(0.56) 錳(10.3) 鎳(13.7) 鉛(34.4)釩(104.8) 鋅(80.0)8.1 重復性，  各實驗室的室內(nèi)相對標準偏差分別為 0.6 1.3 1.4 1.9 2.6 和 3.78.2 再現(xiàn)性 ，實驗室間相對標準偏差為 5.2% 8.3 準確度相對誤差為+4.5%。