細(xì)胞株培養(yǎng)的基本技術(shù)
為了減少污染對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的影響，必須建立細(xì)胞凍存庫(kù)。當(dāng)需要做實(shí)驗(yàn)時(shí)從主細(xì)胞庫(kù)中復(fù)蘇細(xì)胞建立工作細(xì)細(xì)胞株庫(kù)。每一個(gè)凍存標(biāo)本都應(yīng)明確記錄細(xì)胞的性質(zhì)、代數(shù)及有無(wú)污染。同時(shí)還應(yīng)建立規(guī)范的檢測(cè)程序進(jìn)行菌檢及細(xì)胞鑒定。
為了保證培養(yǎng)細(xì)胞系的完整性，必須進(jìn)行詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)記錄，應(yīng)包括以下內(nèi)容:細(xì)胞系的種類(lèi)及來(lái)源、有無(wú)污染(如細(xì)菌，病毒，支原體)、細(xì)胞代數(shù)和倍增時(shí)間、以及選擇性突變。
詳細(xì)的記錄有利于對(duì)細(xì)胞的遺傳及特性在常規(guī)傳代培養(yǎng)中因突變、污染及各種原因?qū)е碌母淖冞M(jìn)行分析。經(jīng)過(guò)連續(xù)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞與它較早代數(shù)的凍存細(xì)胞相比，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞在適應(yīng)環(huán)境的過(guò)程中，其生物特性已發(fā)生了改變。
培養(yǎng)的細(xì)胞株由若干生長(zhǎng)速度及活力各異的亞群組成。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)生長(zhǎng)速，度快及活力高的細(xì)胞亞群逐漸占優(yōu)勢(shì)這種選擇性，趨勢(shì)會(huì)影響整個(gè)細(xì)胞群的生物特性。應(yīng)用不同代數(shù)的細(xì)胞連續(xù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)則結(jié)果會(huì)發(fā)生偏差。建立細(xì)胞凍存庫(kù)就能避免這種影響通過(guò)復(fù)蘇相同代數(shù)的細(xì)胞，人們就能在較為均一的條件下重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
細(xì)胞株培養(yǎng)工作需要清潔，保持良好的環(huán)境及規(guī)范的操作程序。超凈工作臺(tái)是細(xì)胞培養(yǎng)中普遍使用的無(wú)菌操作裝置，它需要合理的布置及經(jīng)常性的維護(hù)。超凈工作臺(tái)的工作原理是驅(qū)動(dòng)經(jīng)濾菌凈化后的空氣，通過(guò)工作臺(tái)面形成氣流屏障，從而阻止外界污染物的侵入并使操作過(guò)程中產(chǎn)生的飛沫限制在超凈工作臺(tái)中。因?yàn)椴僮鬟^(guò)程中可能產(chǎn)生有毒的物質(zhì)，所以采用垂直氣流比水平氣流安全。