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一、代理介紹
農桿菌感受態(tài)制備試劑盒代理——北京百奧創(chuàng)新科技有限公司,提供多個品牌的農桿菌感受態(tài)制備試劑盒,更多產品的介紹,歡迎咨詢!
二、產品介紹
技術代際 | 方法 | 轉化效率 | 特點 |
Di一代(1980s) | 氯化鈣化學法 | 10?–10? CFU/μg | 操作簡便,效率有限 |
第二代(1990s) | 電穿孔法 | 10?–10? CFU/μg | 需要專用設備,細胞損傷大 |
第三代(2000s) | 液氮速凍/凍融法 | 10?–10? CFU/μg | 適合大質粒,重復性挑戰(zhàn) |
第四代(2010s+) | 優(yōu)化化學法+凍干保護 | 10?–10? CFU/μg | 高活性、長期穩(wěn)定、標準化 |
參數 | 規(guī)格 |
制備原理 | 低滲CaCl?/MgCl?處理+PEG輔助細胞膜重塑 |
適用菌株 | GV3101、EHA105、LBA4404、AGL1等常用根癌農桿菌 |
起始材料 | 新鮮過夜培養(yǎng)物或甘油保藏菌 |
制備規(guī)模 | 50 mL培養(yǎng)物→200管(50 μL/管)感受態(tài) |
轉化效率 | ≥1×10? CFU/μg pCAMBIA1301質粒DNA |
有效期 | -80°C保存6個月,轉化效率下降<20% |
試劑盒組成
組分 | 規(guī)格 | 功能 |
Solution I(洗滌緩沖液) | 100 mL | 低滲處理,去除培養(yǎng)基殘留 |
Solution II(感受態(tài)緩沖液) | 50 mL | CaCl?/MgCl?/PEG zui-you化配方 |
Solution III(凍存保護液) | 25 mL | 含7.5% DMSO,玻璃化保護 |
陽性對照質粒 | 10 μL (50 ng/μL) | pCAMBIA1301(卡那+潮霉素抗性) |
使用說明書 | 1份 | 詳細protocol與故障排除 |
關鍵步驟 | 技術細節(jié) | 質控標準 |
菌體收集時機 | OD???=0.4–0.6(對數早期) | 細胞活力zui-jia,細胞壁可塑性強 |
低溫處理 | 全程0–4°C操作 | 抑制代謝,維持膜穩(wěn)定性 |
滲透壓梯度 | 逐步降低離子強度 | 避免滲透休克導致細胞裂解 |
DMSO處理 | 終濃度7.5%,分步加入 | 平衡細胞膜流動性與毒性 |
分裝凍存 | 液氮速凍后-80°C保存 | 避免冰晶損傷,玻璃態(tài)固化 |
參數 | 規(guī)格 |
制備原理 | 高滲蔗糖/甘油洗滌+超純水電滲透處理 |
適用菌株 | 農桿菌及難以制備感受態(tài)的革蘭氏陰性菌 |
轉化效率 | ≥5×10? CFU/μg pCAMBIA1301(電轉條件優(yōu)化后) |
電轉參數 | 2.0 kV, 25 μF, 200 Ω(0.2 cm電轉杯) |
細胞濃度 | 1–2×1011 CFU/mL(濃縮10倍) |
技術突破
創(chuàng)新點 | 效果 |
多步洗滌純化 | 去除外膜脂多糖,降低電轉脈沖阻抗 |
超純水電滲透 | 瞬時水通道形成,DNA高效攝入 |
高滲恢復培養(yǎng) | 電轉后立即SOC-Mg2?高滲恢復,存活率提升3倍 |
無抗生素篩選 | 電轉后4小時表達窗口,避免質粒丟失 |
特性 | 說明 |
適用菌株 | Arqua1、ATCC 15834、K599、MSU440等 |
特殊優(yōu)化 | 針對Ri質粒(pRi)的Vir基因誘導優(yōu)化 |
誘導化合物 | 含100 μM乙酰丁香酮(AS)預處理模塊 |
轉化效率 | ≥5×10? CFU/μg(pCAMBIA2301-GFP) |
應用方向 | 藥用植物毛狀根培養(yǎng)、代謝工程、根系發(fā)育研究 |
發(fā)根農桿菌轉化特色
對比項 | 根癌農桿菌 | 發(fā)根農桿菌 |
致瘤質粒 | Ti質粒(tumor-inducing) | Ri質粒(root-inducing) |
T-DNA來源 | 左右邊界(LB/RB)之間 | TL-DNA + TR-DNA(雙T-DNA) |
植物表型 | 冠癭瘤(undifferentiated) | 毛狀根(hairy root, hormone-free growth) |
應用優(yōu)勢 | 穩(wěn)定轉化、可再生植株 | 快速生長、高代謝物產量、根系特異性表達 |
產品編號 | 菌株背景 | 抗性標記 | 特色應用 |
AI-GV3101 | C58C1 Rif? | Rif?, Gent? | 擬南芥轉化金標準 |
AI-EHA105 | C58C1 Rif? | Rif? | 單子葉植物高效轉化 |
AI-LBA4404 | Ach5 | Rif?, Str? | 安全性高(disarmed Ti) |
AI-AGL1 | C58 Rec? | Rif?, Carb? | 大片段(>150 kb)轉移 |
AI-GV3101(pSoup) | 含pSoup輔助質粒 | Rif?, Gent?, Tet? | pGreen/pSoup雙元系統(tǒng) |
AI-EHA101 | C58C1 Rif? | Rif?, Carb? | 超級Vir突變體 |
質量標準
檢測項目 | 合格標準 | 檢測方法 |
轉化效率 | ≥1×10? CFU/μg(GV3101/EHA105) | 標準質粒轉化實驗 |
無菌檢測 | 無細菌/真菌污染 | LB平板培養(yǎng)48h |
質粒穩(wěn)定性 | 無輔助質粒丟失 | 選擇性平板驗證 |
細胞活力 | >90%(臺盼藍染色) | 顯微鏡計數 |
批次一致性 | CV<15% | 至少3批次驗證 |
三、代理公司介紹
農桿菌感受態(tài)制備試劑盒代理——北京百奧創(chuàng)新科技有限公司,公司產品線涉及細胞與基因治療、免疫學、分子生物學、 細胞生物學等多個方向,專注于生命科學試劑、耗材、細胞、儀器等產品銷售,經營的品牌主要有:ThermoFisher、Sigma、Qiagen、EZBioscience、ZYMO Research、MedKoo、Abcam、Elabscience、GeneTex、Gentaur、immunostar、Invitrogen、invivogen、Kerafast、Coriell、ATCC、SSI-DIAGNOSTICA、凱杰、RD systems等等。我們提供質優(yōu)價美的產品、及時到位的服務,努力成長為生命科學和生物技術企業(yè)的優(yōu)質供應商。
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